啮齿动物体内的病毒投递

啮齿动物体内的病毒投递

材料

试剂

动物：大鼠或小鼠

B H K - 2 1 细胞

克他命

病毒储存液

根 据 方 案 1 制备可表达目的基因的重组 a 病 毒 ，使用前需要用〇 • 22 um 滤器过滤灭菌。

X ylazine

仪器

滤器•（无菌， 0.22um，微孔)

H am ilton 注 射 器（10/m1)

注 射 器（不锈钢）

微型输液泵

聚乙烯管

定向设备

方法

在全身麻醉并伴有体温调节控制及氧气补充的情况下进行微注射。

1 . 用方案 3 确定病毒储存液在 B H K - 2 1 细胞中的大概滴度。

2 . 稀释病毒，使之适用于实验条件。

对纹状体、扁桃体或脑皮层，使用 IO⁵个病毒颗粒；对脑室，使用 IO⁷ 个病毒颗粒。

3 . 通过每千克体重腹膜内注射 2 0 0 m g 克他命和 IOmg x y la zin e 来麻醉实验动物。

4 . 根据动物调整定向设备。

5.用不锈钢注射器吸取病毒，通过聚乙烯管连接微型输液栗和 IOul H am ilton syrin g e。

6 . 以 0. 5ul/m i n 的速度融合病毒溶液。

7.将针在原位多放置 2m i n 。

8.将针缓慢的拿开。

9•缝合伤口，手术后 3〜4 h 内使动物处于温暖的环境下。

10•简单的健康检测（如体重、体温和食量等）和行为反应。

11.在注射后的不同时间点，收集组织和鉴定转基因的表达