向海马区切片的组织培养物传递病毒

向海马区切片的组织培养物传递病毒

材料

试剂

C u ttin g 培养基

1 0 m m o l/L M gC l2

0.5/umol/L 河肠毒素

大鼠海马区切片培养物

根据滚筒管配置制备大鼠海马区的组织型切片培养物。

病毒储存液

根 据 方 案 1 制备可表达目的基因的重组 a 病毒。

仪器

显微操纵器

微吸管

使用前灭菌。

方法

1.用 cutting 培养基将病毒储存液 10〜1000 倍稀释，使之可以区分单个的神经元。

2.用消毒过的吸头吸取 20〜30W 病毒稀释液，用显微操纵器将病毒稀释液注射进入组织切片的椎体细胞层和粒细胞层。

3.将吸头移到邻近的区域，每个切片重复注射 1 〇〜15 次。

4 将切片放在培养基中孵育 10〜60s 以除去河豚毒素和其他残留的病毒颗粒。

5•将切片培养物孵育 1〜3d ，进行表达分析。