单纯疱疹病毒 I 型来源的扩增子载体
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简介
近来，一种基于辅助病毒的技术被用于将单纯疱疹病毒（H S V ) 扩增载体包装进病毒颗粒。这一包装技术已为细菌人工染色体（B A C ) 携带单纯疱疹病毒基因组的“无辅助病毒”方法所取代，后者可以避免H S V 基因组的同类切割/包装序列。使用优化的包装方法将D N A 重组质粒与这个扩增子质粒共转染能产生仅含有扩增子成分的包装。
作者：T.弗里德曼等,译者：殷勤伟等，本实验来自「基因转移」
来源：丁香实验
操作方法
质 粒 D N A 的制备 材料 试剂 琼 脂 糖（电泳级； Invitrogen 或相当的产品） 抗生素 氨节青霉素（100ug/ m l , Sig m a-Aldrich 公司或相当的产品） 卡那 霉 素（lO^g/m l , S i g m a-Aldrich公司或相当的产品） 转化有目的质粒 D N A 的 E• coli
制备 PBAC-V2 DNA制备 PBAC-V2 DNA 材料 试剂 琼 脂 糖（电泳级； Invitrogen 或相当的产品） B t w n H I 限 制 酶（N e w England B i o L a b s 或相当的产品） 氯 霉 素（Sig m a-Aldrich 或相当的产品） 转化有 P B A C -V 2 重组质粒的 E . 甘油保藏菌株
制备 B H K 包装细胞系的维持与扩大培养制备 B H K 包装细胞系的维持与扩大培养 材料 试剂 B H K -21 细 胞（A T C C : C C L -10) 完全生长培养基 DMEM 培养液，无菌、高糖、添加 L-谷氨酸、无 S•丙酮酸 Onvitrogen 或相当的产品) 无 菌 1 0 % 胎 牛 血 清（F B S )，通过支原体测试 1 0 % 青霉素/
制备无辅助病毒的 H SV -I 扩增的包装制备无辅助病毒的 H SV -I 扩增的包装 材料 B H K -21 细 胞（A T C C : C C L -10) 这些细胞如方案 3 中 步 骤 13 所述种板，在做包装实验前至少培养了 3d , 细 胞 达 到 8 0 % 〜1 0 0 % 的汇合度，传 代 B H K 细胞并以 T -150 瓶所需的一半细胞数目种板准备包装实验。体外处理后细胞传代数应
超速离心法提纯包装的 H S V 扩增子超速离心法提纯包装的 H S V 扩增子 材料 试剂 干 冰 含钙离子和镁离子的 Dulbecco 磷酸盐缓冲液（D P B S )，无菌 乙 醇（7 0 % V /V ) 溶于含钙离子和镁离子的 D P B S 蔗 糖 溶 液（3 0 % V /V )，过滤除菌 仪器 Bioguard 生物安全柜（Baker Steriguard
β-半乳糖苷酶表达型扩增载体β-半乳糖苷酶表达型扩增载体 材料 试剂 Dulbecco 基 本 培 养 基（D M E M ; G I B C O B R L ) , 无菌、高糖、含 L -谷氨酰胺、无硫 丙 酮 酸（ Invitrogene 或其他同类产品） D u l b e c c o 磷酸盐缓冲液（ D P B S )，无菌、无钙离子/镁离子 乙 醇（7 0 % V /V
扩增子转导滴定扩增子转导滴定 材料 试剂 方法 接种 NIH-3T 3 细胞 1 • 根 据 滴 定 所 需 的 孔 数 ，预 温 足 够 的 含 5 % F B S 的 T E 和 D M E M 至 3 7 °C 。 2.在安全橱中，吸去细胞培养液。 3•用 5m l 无 C a2V M g 2+的 D P B S 清洗细胞。弃洗
