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人树突状细胞的培养

实验分类:

免疫学实验

最新修订时间:

简介

树突状细胞(dendritic cell,DC)在体内数量极少(它在脾脏贴壁细胞中所占的比例小于1%),从体内分离DC耗时而且细胞产量很低,大大延缓了对DC的研究。


因此,从前体细胞诱导培养大量的DC方法的建立,对于研究DC的生物学功能具有重要的意义。


人源DC的培养主要是由外周血单核细胞或CD34*前体细胞与不同的细胞因子组合进行定向诱导产生。


目前诱导DC产生的细胞因子组合有多种,如IL-4联合粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、TNF-α联合GM-CSF、IFN-α联合GM- CSF、IL-15联合GM-CSF、单独TSLP(thymic stromal lymphopoietin,胸腺基质淋巴细胞生成素)进行诱导等,由此产生的DC特性也各不相同。


目前最常用的方法是GM-CSF和IL-4联合诱导外周血单核细胞和TNF-α联合GM-CSF诱导CD34+前体细胞产生DC。

原理

从外周血分离单核细胞诱导生成树突状细胞的基本原理是外周血单核细胞在GM-CSF和IL-4的作用下可以诱导分化成具有典型细胞学和功能特征的DC。


该方法的DC产出率高,可满足实验及临床需要,是目前应用最广泛的人DC的培养方法。但该方法相对繁琐,耗时较长。


从脐带血获取CD34+细胞培养树突状细胞的基本原理是DC前体(CD34+细胞)在体外具有进一步分化的潜能,在GM-CSF和TNF-α的联合作用下,CD34+细胞可被定向诱导分化成树突状细胞。


利用该方法培养DC会产生两种不同的亚群:CD1a+CD14#-的LC样DC(Langerhans cell,朗格汉斯细胞)和CD1a CD14+的髓系DC。


c-kit配体能够增加培养体系中所有髓系DC的数量,而TGF-β可以促进LC样DC的发育,该方法受血样来源影响较大。


在临床治疗过程中,也可通过给患者提前应用G-CSF增加外周血中DC前体的比例,从外周血中分离CD34+细胞来诱导培养DC用于细胞治疗。

来源:丁香实验团队

操作方法

从外周血分离单核细胞诱导生成树突状细胞

人源DC的培养主要是由外周血单核细胞或CD34*前体细胞与不同的细胞因子组合进行定向诱导产生。目前诱导DC产生的细胞因子组合有多种,如IL-4联合粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、TNF-α联合GM-CSF、IFN-α联合GM- CSF、IL-15联合GM-CSF、单独TSLP(thymic stromal lymphopoietin,胸腺基质淋巴细胞生成素)进行诱导等,由此产生的DC

从脐带血获取CD34+细胞培养树突状细胞

人源DC的培养主要是由外周血单核细胞或CD34*前体细胞与不同的细胞因子组合进行定向诱导产生。目前诱导DC产生的细胞因子组合有多种,如IL-4联合粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、TNF-α联合GM-CSF、IFN-α联合GM- CSF、IL-15联合GM-CSF、单独TSLP(thymic stromal lymphopoietin,胸腺基质淋巴细胞生成素)进行诱导等,由此产生的DC

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