SPA 各种免疫检测试剂制备实验

免疫学实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

SPA 试剂的种类很多，主要有 SPA 菌体，包括荧光菌体和各种抗体标记的菌体；SPA 纯品标记的荧光素、同位素和酶标记试剂；用于亲和层析的 SPA-Sepharose CL-4B、6 MB 和 SPA-agarose，以及用于免疫电镜观察的 SPA-铁蛋白、胶体金和 SPA 标记的血蓝蛋白等。

下面分别介绍几种常用的 SPA 标记试剂的制备方法。

内容来源于《免疫组织化学实验技术及应用》

来源：丁香实验

操作方法

SPA 纯品

1. 用 0.05 mol/L（pH 7.5）的 Tris · HCl 洗下菌苔，每 100 g 湿菌加溶葡萄球菌素 5 mg，调节 pH 值到 3.5，离心后取上清，并将 pH 值调到 7.0。2. 用饱和硫酸铵沉淀，溶解透析，透析物用 DEAE-Sephadex A50 纯化，以 0.1 mol/L 碳酸氢铵（NH4HCO3）平衡后上样，再平衡过夜。3. 用 0.4 mol/L NH4HCO3

荧光 A 蛋白纯品

1. 取一定量的 A 蛋白纯品，用内含 0.05 mol/L NaCl 的 0.1 mol/L 氧化钠溶液调节 pH 值到 9.0。2. 于 23℃ 暗处条件下，按 1 mol 的 A 蛋白中加入 2.8 mol 的 FITC，搅拌 60 min，随时用含 0～15 mol/L 氯化钠的 0.1 mol/L 氢氧化钠使 pH 值维持在 9.0～9.5 之间。3. 然后将标记 SPA 用平衡盐溶液于

酶标记 A 蛋白纯品

1. 取 HRP 5 mg，溶于 0.1 ml 新鲜配制的 0.3 mol/L（pH 3.1）NaHCO3 中，加 0.1 ml 1％二硝基氟苯-无水乙醇，于室温中避光轻轻搅拌 1 h。2. 再加入 0.08 mol/L NaIO3 1 ml，室温中搅拌 30 min。3. 再加 0.08 mol/L 乙二醇 1 ml，混匀后轻轻搅拌 1 h。4. 装入透析袋中，在 4℃ 条件下，用 0.01