原理
荧光 A 蛋白纯品是在弱碱性条件下,由荧光素通过蛋白上的氨基共价包绕于 A 蛋白纯品制成。其制备如下。
材料与仪器
A 蛋白纯品
氧化钠(含NaCl) 平衡盐溶液 氢氧化钠(含 NaCl) FITC
Sephadex G-25 柱 棕色瓶
氧化钠(含NaCl) 平衡盐溶液 氢氧化钠(含 NaCl) FITC
Sephadex G-25 柱 棕色瓶
步骤
1. 取一定量的 A 蛋白纯品,用内含 0.05 mol/L NaCl 的 0.1 mol/L 氧化钠溶液调节 pH 值到 9.0。
2. 于 23℃ 暗处条件下,按 1 mol 的 A 蛋白中加入 2.8 mol 的 FITC,搅拌 60 min,随时用含 0~15 mol/L 氯化钠的 0.1 mol/L 氢氧化钠使 pH 值维持在 9.0~9.5 之间。
3. 然后将标记 SPA 用平衡盐溶液于 4℃ 透析数次,过 Sephadex G-25 柱,除去未标记的 FITC,并调节浓度到 1 mg/ml,装入棕色瓶,并保存于 -20℃ 冰箱中。
来源:丁香实验