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蛋白质分离和分析

实验分类:

免疫学实验

最新修订时间:

简介

详细阐述利用亲和层析分离蛋白质的过程,进行蛋白质分析时,需将此规模缩小至微量离心管中进行免疫沉淀过程,对于单一的蛋白质或由相同亚基组成的蛋白质,经单向凝胶电泳后检测到单一的 蛋 白 质 条 带对荧光染色法进行了阐述,它主要用于磷蛋白和糖蛋白的检测。为了确定蛋白质是否是特异性抗原,可采用相对应的抗体进行免疫印迹分析
作者:J.E.科利根等,译者:曹雪涛等,本实验来自「精编免疫学实验指南」

来源:丁香实验

操作方法

免 疫 亲 和 层 析

基 本 方 案 可 溶 性 或 膜 结 合 抗 原 的 分 离 材 料 抗 体(Ab)-Sepharose (单兀 12. 2) 活 化 的(对照)Sepharose填料,用于制 备 A b -Sepharose填 料(单 元 12. 2),但去除了抗体或偶联时用无关抗体替代 细胞或匀浆的组织 T S A 溶液,冰预冷 裂解缓冲液

免疫沉淀

基 本 方 案 1 用非变性去垢剂裂解细胞制成的悬液进行免疫沉淀 材 料 未标记或标记的细胞悬液 P B S ,冰预冷 非变性裂解缓冲液,冰预冷 5 0 % (V A O protein A-Sepharose 填 料(Sigma, Amersham Pharmacia Biotech)保存于含 0.1% (m /V ) B S A 和

凝胶蛋白质染色

基 本 方 案 1 考马斯亮蓝染色 检测范围为〇.3〜lMg 每蛋白质条带。 材 料(带 V 项 目 见 附 录 1) 聚丙烯酰胺凝胶(单 元 12. 3) 考马斯亮蓝、银染用固定液 考马斯亮蓝染液 甲醇/乙酸脱色液 7 % (V /V ) 水乙酸 Whatman 3M M 滤 纸(可选) 干 胶 仪(可选

免 疫 印 迹 和 免 疫 检 测

基 本 方 案 1 液体容器中的蛋白质印迹 材 料 待分析样品 标准分子质量蛋白质,预 染 型(Sigma 或 Bio-Rad) 或 生 物 素 化 型(Vector labs 或Sigma) 转移缓冲液 无粉手套 Scotch-Brite 垫 片(3M ) 或类似海绵 Whatman 3M M 滤纸或类似物 转 移膜:0.45um 硝 酸 纤 维 素 膜(Mi

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