丁香实验-30万科研人都在用的实验宝库

)的DEPC处理水中，检测后分装，置于-70℃低温条件下保存。注意事项 RNA提取过程中，为了保证所提取的RNA的纯度和完整性，其中有两个方面的问题需要特别控制，一是去除与RNA结合的蛋白质，二避免内外源Rnase对RNA的降解。在RNA的提取中，常采用的蛋白质变性剂有苯酚、氯仿、十二烷基磺酸钠(SDS)等。为防止外源Rnase的污染，所有试验用品均需用DEPC处理并高压灭菌，所有试剂配制均需使用经DEPC处理过的水或灭菌处理。内源RNase的抑制采用异硫氰酸胍等强还原剂

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Northern杂交实验指导之一：RNA提取

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用RNA的免疫沉淀-rPCR方法进行体内分离核糖核蛋白复合体实验

RNA 免疫沉淀-随机聚合链反应方法可用来鉴定细胞内 RNP 复合物中的 RNA 组分。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。

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抑制细菌转录终止检测技术筛选 RNA 结合蛋白实验

一种通过筛选重组 cDNA 文库研究多肽与 RNA 相互作用的细菌抗转录终止检测系统。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。

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单链DNA文库的SELEX筛选

一、材料与设备1. 5' '端标记有生物素的 3' 引物。2. 链亲和素磁珠（Promega 公司）。其他设备与试剂与 RNA 文库方案一致。二、操作方法1. 不对称 PCR 制备 ssDNA(1) 首先将筛选获得的 ssDNA 参照 RNA 文库的实验方案扩增成双链 DNA，纯化回收。(2) 确定不对称 PCR 制备 ssDNA 文库所需的最佳双链 DNA 模板量。取不同量的上述 PCR 产物为模板，不对称 PCR 扩增 35 个循环。不对称 PCR 反应体系如下：10X PCR 反应缓冲

操作方法所属实验：单链 DNA 文库的 SELEX 筛选实验

随机RNA文库的SELEX筛选

4Ac，10 mmol/L MgAc2，0.1% SDS，1 mmol/L EDTA（pH 8.0）。8. RNA 凝胶洗脱缓冲液：0.2% SDS，0.5 mol/L NH4Ac，1 mmol/L EDTA（pH 8.0）。9. SHMCK 缓冲液：20 mmol/L HEPES（pH 7.35），120 mmol/L NaCl，5 mmol/L KCl，1 mmol/L CaCl2，1 mmol/L MgCl2。10. 封闭液：SHMCK 缓冲液 + 0.1% 明胶。11. 洗涤及洗脱缓冲

操作方法所属实验：随机 RNA 文库的 SELEX 筛选实验

Northern杂交实验指导之二：RNA质量检测

相关专题二、RNA质量检测提取的RNA需要对其质量和数量进行检测。实验室常用的方法有紫外吸收值检测和电泳检测两种。方法一、紫外吸收检测试剂：TE ( 10mmol/L Tris, 1mmol/LEDTA )。 dH2O 试验程序 1.预热紫外分光光度计 10～20min.。 2.取两个1ml的狭缝石英杯，一个装入1mlTE溶液作为空白

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Northern杂交实验指导之二：RNA质量检测

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RNA 干涉实验

RNA 干涉（RNA1）是指在真核细胞中引入双链 RNA ( doubt-stranded RNA，dsRNA ) 分子从而导致具有序列同源性的基因产生特异件基内沉默（gene silencing ) 的现象。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。

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补骨脂素介导的光交联反应研究RNA与蛋白质分子间的作用实验

基于补骨脂素光化学反应的 RNA-蛋白分子复合物分析法，能够在数据相对缺乏的情况下分析生理条件下的 RNA-蛋白复合物的拓扑构象。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。

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液氮冻存法

细胞培养的传代及日常维持过程中，在培养器具、培养液及各种准备工作方面都需大量的耗费，而且细胞一旦离开活体开始原代培养，它的各种生物特性都将逐渐发生变化并随着传代次数的增加和体外环境条件的变化而不断有新的变化。因此及时进行细胞冻存十分必要。细胞冷冻储存在-70℃冰箱中可以保存一年之久；细胞储存在液氮中，温度达-196℃，理论上储存时间是无限的。来源《中国医科大学实验指导手册》

操作方法所属实验：细胞的冻存与复苏实验

免疫荧光定位法

核蛋白是指在细胞质内合成，然后运输到核内起作用的一类蛋白质。如各种组蛋白、DNA合成酶类、RNA转录和加工的酶类、各种起调控作用的蛋白因子等。核蛋白一般都含有特殊的氨基酸信号序列，起蛋白质定向、定位作用。来源《细胞生物学实验手册》

操作方法所属实验：核蛋白的免疫荧光定位实验

Northern杂交实验指导之五：RNA探针制备

相关专题 Northern Blotting技术专题五、RNA探针制备(根据the DIG system user's guide) A. 地高辛标记的体外转录试剂及其配制(试剂盒提供)： 10× NTP标记混合物：in Tris-HCl (pH 7.5) 10mmol ATP 10mmol CTP 10mmol GTP 6.5mmol

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Northern杂交实验指导之五：RNA探针制备

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通过高等真核生物无细胞提取物分析 mRNA 的降解实验

细胞的环境、复制周期的状态和分化状态的改变会引起一些 mRNA 半衰期的改变。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。

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