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PCR 实验基础原理

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聚合酶链式反应

本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。

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聚合酶链式反应（PCR）

PCR技术可用于：（1）检验感染性疾病是否处于隐性或亚临床状态；（2）有效检测癌基因的突变，准确检测癌基因的表达量；（3）临床应用于检测地中海贫血的基因突变。

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聚合酶链式反应

一、材料1. 缓冲液与溶液10X 扩增缓冲液氯仿4 种 dNTP 贮存液（20 mmol/L，pH 8.0)2. 酶与缓冲液热稳定 DNA 聚合酶3. 凝胶聚丙烯酰胺凝胶或琼脂糖凝胶4. 核苷酸与寡聚核苷酸旁观者 DNA正向引物（20 μmol/L）及反向引物（20 μmol/L) 溶于水中模板 DNA5. 特殊设备自动微量移液器的屏蔽型枪头离心管（0.5 ml，薄壁扩增反应专用离心管）正向排液式移液器6. PCR 仪二、方法1. 按以下次序，将各成分加在 0.5 ml 灭菌离心管、扩增

操作方法所属实验：聚合酶链式反应

PCR偶联连接酶链式反应在临床诊断及流行病调查中的应用

PCR偶联连接酶链式反应在临床诊断及流行病调查中的应用是利用一种测定DNA序列中单碱基突变的DNA扩增技术的一种PCR。即以序列互补方式杂交到一个靶分子的相邻寡核苷酸探针,可被热稳定DNA连接酶连接；若引物连接处有1个碱基不配对,则2条引物不能被连接,扩增反应不能进行。

操作方法所属实验：PCR在临床诊断及流行病调查中的应用

问如何提高DNA浓度？

土井挞克树

浓度不够的时候可以加引物，或者聚合酶链式反应

实验问答2 回答1487 围观

问荧光信号问题

loveliufudan

在核酸检测中，实验组加入了DNA模板，而空白组中只有用水代替模板，因此实验组应该会有更多的靶分子（模板）可供引物探针与之匹配，从而发生聚合酶链式反应 (PCR)。这会导致实验组反应体系中产生更多的荧光信号，因为PCR产物与探针发生结合后荧光染料被激活，发出荧光信号。相比之下，空白组中没有模板的存在，PCR反应几乎不会发生，因此会产生很少的荧光信号。此外，空白组中可能会存在背景噪音或杂质信号，但这些信号的强度通常不足以与实验组的荧光信号相比。因此，在流式检测中，实验组的荧光信号应该比空白组的荧

实验问答2 回答168 围观

【转帖】聚合酶链式反应（PCR）

PCR扩增技术，即聚合酶链式反应，是美国科学家K.B.Mullis于1983年发明的一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法，故又称为基因的体外扩增法。现在的PCR扩增不仅可以用于基因的分离、克隆和核苷酸序列分析，还可以用于突变体和重组体的构建，基因表达调控的研究，基因多态性的分析，遗传病和传染病的诊断，肿瘤机制的探索，法医鉴定等诸多方面。 PCR扩增技术的基本原理 PCR扩增，类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。 PCR反应由变性--退火

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多聚酶链式反应即PCR（polymerase chain reaction）技术

多聚酶链式反应即PCR（polymerase chain reaction）技术，应用这一技术可以将微量目的基因（DNA片段）扩增一百万倍以上。PCR反应理论的提出和技术的完善对于分子生物学的发展具有特殊的意义，它以敏感度高、特异性强、产率高、重复性好以及快速简便等优点迅速成为分子生物学研究中应用最为广泛的方法之一，并使得很多以往无法解决的分子生物学研究难题得以解决。发明这一技术的K. Mullis因此贡献而获得了1993年度诺贝尔化学奖。

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ISPCR 扩增的产物的杂交和检测实验

聚合酶链式反应简称PCR（英文全称：Polymerase Chain Reaction）（又称：多聚酶链式反应），聚合酶链式反应，是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，由高温变性、低温退火（复性）及适温延伸等几步反应组成一个周期，循环进行，使目的DNA得以迅速扩增，具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。

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动物 DNA 提取实验

动物肝脏DNA提取可以：（1）用于法医学鉴定；（2）诊断和系统发育研究；（3）用于进一步的聚合酶链式反应（PCR）以获得DNA。

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荧光定量聚合酶链式反应检测可溶性细胞因子

荧光定量 PCR 技术, 是指在 PCR 反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的变化实时检测 PCR 扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过 Ct 值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析。

操作方法所属实验：细胞因子检测

基本方案

）然后，将玻片浸于去离子水中终止反应，其间换水数次。 9. 室温下，以0.2% Gills 苏木精（如用于过氧化物酶的显色）或1%核酸固红染液（如用基于碱性磷酸酶的显色）染片5 min，浸玻片于自来水中，换水数次。10. 室温下，依次将玻片置于50%、70%、90%和100%乙醇中，分别温育1 min 进行脱水，然后晾干。11. 毎孔加1滴固片介质，压上盖玻片，立刻进行结果观察（小心勿动盖玻片），或放室温过夜，使压片介质干燥。图一、原位反转录/聚合酶链式反应。图二、HIV-1感染的微管

操作方法所属实验：ISPCR 扩增的产物的杂交和检测实验

问梅雨季节，怎么防止支原体污染？

loveliufudan

以下是一些防止支原体污染的常用方法：1.严格的无菌操作：在实验室中进行严格的无菌操作，包括使用无菌技术和消毒实验台、操作器具和培养皿。确保培养物和培养液都不受外界环境的污染。2.经常更换培养基：定期更换培养基可以减少细菌和支原体的增殖。培养基中添加适量的抗生素，如青霉素和链霉素，可以预防细菌和支原体的污染。3.定期检测和筛查：使用特定的检测方法，如聚合酶链式反应（PCR）或荧光染色等，定期对培养物进行支原体检测和筛查。这可以帮助及早发现并采取措施处理污染问题。4.个人卫生和清洁：保持良好的个人

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问1.如遇组织标本，如何保证单细胞测序的细胞单一性？ 2.如何就获得的数据进行深度挖掘？ 3.如何平衡机体的个体差异与测序广泛性？

loveliufudan

1.针对组织标本进行单细胞测序时，保证细胞单一性的关键在于细胞的分离和捕获。通常采用酶消化、机械切割或磨碎等方法对组织样本进行分离和制备，然后通过流式细胞术、微流控芯片或微管阵列等技术将单个细胞捕获到反应管中进行测序。在这个过程中，需要注意以下几点：对组织样本进行消化或切割时，要尽量减少细胞的损伤和死亡，以避免影响单细胞测序的准确性。在捕获单个细胞时，要确保细胞的完整性和纯度，避免污染和杂交现象的发生。在进行单细胞测序前，可以通过显微镜观察、聚合酶链式反应（PCR）等方法对单个细胞的纯度和单一

实验问答2 回答270 围观

聚合酶链式反应步骤、体系及问题分析

相关专题聚合酶链式反应(PCR)是分子生物学常用技术，是体外扩增DNA 的方法，设计生物学的各个领域，基本是进了实验室都必须掌握的技术。对于刚入生物门的我们简单了解其步骤、反应体系很有必要。聚合酶链式反应(polymerase chain reaction ,PCR )步骤三步： 1 变性：模板DNA加热变性 2 退火引物与它的靶序列发生退火，引物DNA量多

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聚合酶链式反应步骤、体系及问题分析

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PCR-SSCP 技术实验

聚合酶链式反应-单链构象多态（Polymerase Chain Reaction-Single Strand Conformation Polymorphism，PCR-SSCP）技术可用于：（1）癌基因和抑癌基因突变的筛查检测；（2）遗传病的致病基因分析；（3）基因诊断，基因制图等领域。

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酵母菌DNA制备实验

酵母分子生物学研究常常需要分离质粒及酵母菌染色体DNA，质粒DNA用来转化大肠扞菌，而染色体DNA用于Southern 杂交分析，聚合酶链式反应法体外扩增或整合性质粒的克隆。

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以 cDNA 为模板的 PCR 实验流程

1、PCR 系统中的酶加入量为 1 个单位，注意购入酶的单位；2、干粉引物拿到后低速离心后用高压灭菌 ddH2O 稀释 10 μmol/mL；3、退火温度根据引物序列按公式 Tm ＝ 2 ×（A + T）+ 4 ×（C + G）确定；4、聚合酶链式反应循环中的延伸时间需根据序列长度和聚合酶效率确定。

操作方法所属实验：菌落 PCR