多聚酶链式反应即PCR（polymerase chain reaction）技术

多聚酶链式反应即PCR（polymerase chain reaction）技术，应用这一技术可以将微量目的基因（DNA片段）扩增一百万倍以上。PCR反应理论的提出和技术的完善对于分子生物学的发展具有特殊的意义，它以敏感度高、特异性强、产率高、重复性好以及快速简便等优点迅速成为分子生物学研究中应用最为广泛的方法之一，并使得很多以往无法解决的分子生物学研究难题得以解决。发明这一技术的K. Mullis因此贡献而获得了1993年度诺贝尔化学奖。
　　一、PCR技术的工作原理
PCR的基本工作原理是以拟扩增的DNA分子为模板，以一对分别与模板5'末端和3'末端互补的寡核苷酸片段为引物（primer），在耐热DNA聚合酶的作用下，按照半保留复制的机制沿着模板链延伸直至完成新的DNA分子合成。重复这一过程，即可使目的DNA片段得以大量扩增（图14-1）。

组成PCR反应体系的基本成分包括：模板DNA、特异性引物、耐热DNA聚合酶（如Taq DNA聚合酶）、dNTP以及含Mg2＋的缓冲液。
PCR的基本反应步骤包括：（1）变性：将反应体系加热至95℃，使模板DNA完全变性成为单链，同时引物自身以及引物之间存在的局部双链也得以打开；（2）退火：将温度下降至适宜温度使引物与模板DNA退火结合；（3）延伸：将温度升至72℃，耐热DNA聚合酶发挥酶活性，以dNTP为底物催化DNA的合成反应。上述三个步骤构成一个循环，新合成的DNA分子继续作为下一轮合成的模板，经多次循环（25～30次）后即可达到扩增DNA片段的目的。