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专题封面
单细胞多组学技术与联合应用
专题29 内容  276 订阅
RIP 技术
研究细胞内RNA与蛋白结合情况
实验概况收录 1 操作方法 · 3 相关问答 · 3 相关文章
原位PCR技术
原位 PCR(in situ PCR)就是在组织细胞里进行PCR反应,它结合了具有细胞定位能力的原位杂交和高度特异敏感的PCR技术的优点,在分子和细胞水平上检测特定的基因组序列、转基因及外源基因,对研究疾病的发病机理和临床过程及病理的转归有重大的实用价值,在分子生物学、细胞学、分子病理学及临床诊断领域里具有巨大的应用前景。根据操作方法的不同,原位PCR可分为间接法和直接法。直接法操作步骤较少,但具有比较高的假阳性率;间接法步骤相对较多,需要的时间长,但结果可靠。
实验概况收录 1 操作方法 · 3 相关文章
PCR技术
1.  由于PCR反应灵敏度很高,因此要特别主意防止DNA污染的发生。样品间的相互污染可能产生假阳性结果,特别是将PCR技术应用到临床病原菌感染确定中。2.  如果是公用的、没有密码保护的PCR仪,经常检查PCR仪上的程序正确与否。3.  不使用过量试剂“less is usually better (more specific)”。4.  试剂购回后应分装成小份使用,这样一旦有污染发生,可以立即丢弃污染的试剂,不会造成大的损失;试剂分装也有助于减少反复冻融次数(例如dNTPs对反复冻融敏感
操作方法所属实验:聚合酶链式反应(PCR)
RIP技术
(一). 细胞裂解液获取A. 单层细胞或者贴壁细胞处理1. 冷PBS清洗培养皿或培养瓶中的细胞两次2. 加入冷PBS后用细胞刮将细胞刮下来,收集至enpendoff管3. 1500rpm,4℃离心5min,弃上清,收集细胞4. 用与细胞等体积的RIP裂解液重悬细胞,吹打均匀后于冰上静置5min5. 每管分装200ul细胞裂解液,贮存于-80℃B. 悬浮细胞处理:先收集细胞再计数,然后清洗裂解C. 组织样品处理1.冷PBS清洗新鲜切下的组织三次2. 加入冷PBS后,用匀浆器或其他细胞
操作方法所属实验:RIP 技术
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SWATH技术

相关专题蛋白质组蛋白质组(proteome)一词是澳大利亚科学家Williams和Wilkins于1994年首先提出的,它是指一个细胞或一个组织基因组所表达的全部蛋白质总和,是对应于一个基因组的所有蛋白质构成的整体。短短20年间,蛋白质组的研究取得了惊人的进展,这相当程度上要归功于质谱技术在蛋白质组中的应用和不断发展。同时,蛋白质组和基因组的发展是相辅相成的,凡是经过基因组测序的物种,都可以用质谱技术大规模鉴定其蛋白质组成。当前,比较主流的蛋白质组学研究方案当属LC-MS/MS系统, LC

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质谱技术及其应用

先导篇 21 世纪的最前沿科学之一,随着人类第一张基因序列草图的完成和发展,生命科学的研究也将进入一个崭新的后基因组学,在基因组-转录组-蛋白组-代谢组的系统生物学框架内(图 1),代谢组是生物动态调控系统中最接近于表型的阶段,是生命的本质特征和物质基础。代谢组学一方面由于与健康疾病、营养科学、药物毒性、环境科学等密切相关,未来广阔;另一方面,由于代谢物结构迥异、种类众多,在技术开发和应用方面也面临巨大挑战。 图 1 | 组织/细胞的系统生物学框架,涵盖了基因组、转录组、蛋白组、代谢组,脂质

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专题封面
表观遗传学研究技术概览
专题29 内容  546 订阅
核移植技术
核移植技术所依赖的理论基础是来源于同一胚胎或细胞系的所有细胞核都含有与受精卵完全相同的遗传信息,从基因组成上应该具有与受精卵一样的指导个体发育的全部潜 能 。当供体核移植到受体胞质后,供 体核会在胞质因子的作用下,发生重新编程(reprogramming),从而回到合子核的状态,指导重组胚发育成一完整的个体。核移植技术揭示了细胞质对细胞核的巨大影响作用,增进了对细胞分化、细胞全能性等发育生物学基本问题的深入认识;哺乳动物核移植的成功说明已经髙度分化的体细胞核仍具有发育全能
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cDNA 合成技术
通过体外无细胞系统翻译找出目的基因mRNA以后,变可进行cDNA第一链的合成,其步骤如本文所介绍.
实验概况收录 1 操作方法 · 1 相关问答 · 3 相关文章
cDNA合成技术
cDNA第一链的合成:1.在Ependorf管中加50pmol/L的一种α32PdNTP和1mg/ml的mRNA 10μl(10μg),100m mol/L甲基氢氧化汞1μl,室温反应l0分钟,使RNA变性.2.加100m mol/l的β-巯基乙醇2μl和10m mol/l RNase抑制剂2μl,室温放置5分钟.β-巯基乙醇有稳定逆转录酶活性的作用.3.向上述反应混合物加lmg/ml的引物01igo dT(12~18聚体)10μl,1mol/l Tris.HCl(pH8.3)5μl,11
操作方法所属实验:cDNA 合成技术
配基固相化技术
溴化氰活化的琼脂糖凝胶用于配体固相化是实验室最常用的固相化技术之一。其原理是溴化氰活化的介质与配体主要的氮基反应形成异脲键。但是这样偶联的亲和柱多次重复使用时,将会有少量配体脱落,所以反复使用的亲和柱应考虑选择其他活化的介质。异脲键的形成伴有荷电基团的增加,将会影响离子交换作用。为了克服这一影响要在纯化时采用至少 0.1 mol/L 的缓冲盐液。该固相化方法简便廉价,并可广泛用于蛋白质、核酸和凝素。
操作方法所属实验:亲和柱的制备实验
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这几类 PCR 技术你知道吗?

多聚酶的作用,而且具有反转录酶活性,可利用其双重作用在同一体系中直接以 mRNA 为模板进行反转录和其后 PCR 扩增,从而使 mRNA 的 PCR 步骤更为简化。所需样品量减少到最低限度,临床小样品的检测非常有利。用一步法扩增可检测出总 RNA 中小于 1ng 的低丰度 mRNA。该法可用于低丰度 mRNA 的 cDNA 文库的构建及特异 cDNA 的克隆,并有可能与 Taq 酶的测序技术相组合,使得自动反转录、基因扩增与基因转录产物的测序在单管中进行。 两步法:由于单管反应时 RT

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定位突变和 DNA 改组技术

DNA 序列的改变称为突变, 这将导致相关蛋白质的序列变化。 DNA 上特定核苷的取代技术称作基因定位突变法 (site directed mutagenesis)。 通过病酶动物将突变的基因导入微生物体内即可产生非天然蛋白. 这种方法在研究蛋白质中特定氨基酸的功能上极为有价值。与定位突变不同, 在 PCR 中增加 Mg2 离子可产生随机点突变; 高盐度降低了 DNA 聚合酶的再现精度。突变频率可由离子浓度控制。这种方法称作"易错 PCR"。将突变基因重组在加速产生多样性方面较定位突变效率更高

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专题封面
细胞培养与基因治疗技术指南
专题23 内容  122 订阅
Southern印迹技术
印迹杂交是指将待测核酸片段结合到一定的固相支持物上,然后与存在于液相中的标记探针进行杂交的过程。Southern印迹技术(Southern blot)是将DNA转移到固相支持物上,然后与存在于液相中的标记探针进行杂交的过程。Southern印迹技术可检测特定大小DNA分子的含量,常用于克隆基因的酶切图谱分析、基因组基因的定性及定量分析、基因突变分析及限制性长度多态性分析(RELP)等。
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