求助！神经逆向追踪技术？

这个很多人在做，已经很成熟了。我们实验室总用的是电离子渗透导入法。电离子渗透导入法是利用示踪剂分子所带电荷量的大小，通过给予外加电流使示踪剂分子被电场作用力导入至注射部位的一种示踪剂导入方法。通常情况下，人们会将电流直接外加到吸有1-10%浓度示踪剂溶液的微量移液器上，根据电极头直径的不同，电离子渗透导入法除了可以应用于示踪剂的细胞内注射外，还可以应用于示踪剂的细胞外注射。以具体的操作为例，在进行电离子渗透导入法细胞内注射时，逆行示踪剂通常被溶解在2M氯化钾溶液或2M乙酸钾溶液内，注射时外加电流的强度为2-5nA，并至少维持10-60分钟。研究发现，电流维持时间作为电离子渗透导入法中最主要的调控参数，其可随着应用低摩尔浓度的电极溶液而被极大程度的缩减，例如将生物胞素以电离子渗透导入法的方式完全地导入至神经元胞体内，在应用0.5M的乙酸钾溶液时只需用3nA的电流维持3分钟即可完成[61]。对于电离子渗透导入法的细胞外注射，其电极头的直径会相对更大，外加的电流也会增加至10μA，此外，电离子渗透导入法还具备一个独到的优势，其可以依靠传统的电生理技术对目标靶区进行精确的定位，从而使示踪剂的导入更为准确。研究中应用较多的逆行示踪剂有：霍乱毒素B亚单位、荧光金、辣根过氧化物酶、固蓝、异硫氰酸盐罗丹明、羰花青染料、荧光乳胶微球、生物胞素和神经生物胞素等；常用的应用方法有：压力注射法、电离子渗透导入法和染料晶体植入法。