RIP 技术

蛋白质实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

研究细胞内RNA与蛋白结合情况

原理

1. 用抗体或表位标记物捕获细胞核内或细胞质中内源性的RNA结合蛋白。 2. 防止非特异性的RNA的结合。 3. 免疫沉淀把RNA结合蛋白及其结合的RNA一起分离出来。 4.结合的RNA序列通过microarray（RIP-Chip），定量RT-PCR或高通量测序（RIP-Seq）方法来鉴定。

应用

细胞研究

来源：丁香实验

操作方法

RIP技术

（一）.细胞裂解液获取A.单层细胞或者贴壁细胞处理1. 冷PBS清洗培养皿或培养瓶中的细胞两次2. 加入冷PBS后用细胞刮将细胞刮下来，收集至enpendoff管3. 1500rpm，4℃离心5min，弃上清，收集细胞4. 用与细胞等体积的RIP裂解液重悬细胞，吹打均匀后于冰上静置5min5. 每管分装200ul细胞裂解液，贮存于-80℃B.悬浮细胞处理：先收集细胞再计数，然后清洗裂解C.组织样品