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蛋白质凝胶电泳凝胶的制备

蛋白质凝胶电泳通常用于（1）分析分子生物学、遗传学和生物化学（2）制备技术（3)采用某些方法（如质谱(MS)、聚合酶链式反应(PCR)、克隆技术、DNA测序或者免疫印迹）检测之前部分提纯分子。

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凝胶过滤实验

蛋白质纯化的层析技术中，凝胶过滤比较独特,它是基于蛋白质分子质量的相对大小而分离。与传统的过滤相反，通过凝胶过滤柱后,并没有任何蛋白质留存于其中。凝胶过滤优缺点明显;优点在于，脆性蛋白质与层析固定相结合并不会破坏其功能;缺点在于,和凝胶不结合则限制层析的分辨率。作者：伯吉斯等,主译：陈薇，本实验来自「蛋白质纯化指南」

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凝胶法

1. 取鲎试剂一支，按说明加入规定量的无热原的无菌蒸馏水使之溶解。2. 取内毒素标准品，用无热原的无菌蒸馏水溶解。所用浓度按毎批溶解构的敏感性而定。一般稀释至 20 Eu／ml（Eu 为内毒素单位）。3. 取 3 支小试管，分别编号，按下表加人各成分并进行操作。4. 孵育结束，将试管从水浴中轻轻取出。不要振动试管，以防凝胶破坏，产生假阴性。缓缓倒转试管 180°，如凝成固体凝块，为阳性；呈半流动状为弱阳性；仅见混浊度增加，或有少量絮状钧，或无变化，则为阴性。

操作方法所属实验：内毒素测定实验

凝胶迁移

。小心吸去残余液体。微晾干沉淀，但不宜过分干燥。 5. 加入100微升TE，完全溶解沉淀。标记好的探针最好立即使用，最长使用时间一般不宜超过3天。标记好的探针可以保存在 -20℃。三、EMSA 胶的配制 1. 准备好倒胶的模具。可以使用常规的灌制蛋白电泳胶的模具，或其它适当的模具。最好选择可以灌制较薄胶的模具，以便于干胶等后续操作。为得到更好的结果，可以选择可灌制较大 EMSA 胶的模具。 2. 按照如下配方配制20毫升4％的聚丙烯酰胺凝胶(注意：使用29:1等不同比例的Acr/Bis

操作方法所属实验：凝胶迁移实验（EMSA）

问EP凝胶的聚合缓冲液是什么？

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琼脂糖凝胶电泳缓冲液常用的缓冲液有TAE和TBE，而TBE比TAE有着更好的缓冲能力。

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问关于凝胶电泳结果图分析

实验问答4938 围观

凝胶过滤层析

凝胶过滤层析原理凝胶过滤层析是根据分子大小和形状的差异进行分离的一种简单可靠的层析技术。当生物分子通过凝胶过滤填料时，分子量大的生物分子只能通过大的孔径，小分子量的生物分子会经过小的孔径，因此和大分子量的生物分子相比，小分子量的生物分子经过的路程会更长。凝胶过滤层析的全过程只用一种缓冲液即可将不同分子量的生物分子进行分离。特点填料主要为惰性（无反应性或吸附性）的球状疏松多孔颗粒，具有均匀的分离范围目标分子不与介质结合，通常仅需一种缓冲液缓冲液成分不直接影响分辨率（即峰之间的分离

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凝胶过滤的几道弯

纯化达人成长记之凝胶过滤实验的层析原理解析，帮助您更好地理解不同的凝聚过滤应用，解答您在凝聚过滤实验中的常见问题。

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凝胶电泳实验

在优化实验条件时，应该同时用含有甘油和不含甘油的凝胶分离PCR产物，并对放射性自显影的结果进行比较。利用这两种凝胶分析同一种样品的预实验结果可以在24h之内获得。一旦实验条件确定下来，特定实验所优选的凝胶类型就可以应用到该基因座的所有样品的分析中。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。

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单向凝胶电泳实验

本书所介绍的S D S ——P A G E 方法将满足本领域大部分应用的需要。作者：伯吉斯等,主译：陈薇，本实验来自「蛋白质纯化指南」

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凝胶吸附法

磷酸钙凝胶：这是病毒凝胶吸附法中较为常用的凝胶，由 0. 5 mol/L CaCl2 和 0. 5mol/L Na2HPO4 溶液混合制备凝胶状沉淀物，用 0. 001mol/L 磷酸盐缓冲液悬浮，置千 4℃ 4~5小时使之充分沉淀后应用。氢氧化锌凝胶：用 7 mol/L 氨水和 0. 1 mol/L 醋酸锌溶液滴加混合 (pH8. 5) 制备氢氧化锌凝胶。把氢氧化锌凝胶混在病毒悬液中，形成的复合物沉淀后，用 0. 08 mol/L EDTA(pH8. 5)处理能比较好地解离病毒。

操作方法所属实验：吸附法纯化病毒实验

照相、凝胶干燥

为了发表文章和分析结果的保存，应将有价值的结果在干燥以前先进行照相，以免在干燥时降低分辨率，甚至失去弱带。凝胶可直接放在带有乳白色屏幕的发光板上，使用细颗粒的全色胶卷和一个中红滤片照相，以增加蛋白带和背景的反差。虽然平板凝胶可存放在含有 7% 醋酸的密封的塑料袋中。但是即使如此也只能保存 1~3 个月，且占有空间太多，不易保管。凝胶干燥目前有两种方法，厚度大于约 1.0 mm 的凝胶为防止日后凝胶的龟裂，应该用凝胶干燥仪进行干燥。厚度小于 1.0 mm 的凝胶则可采用自然干燥法。采用凝胶

操作方法所属实验：常规聚丙烯酰胺凝胶电泳实验

问外泌体在水凝胶中的释放

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从你的描述中，我猜测你是在使用水凝胶来固定细胞，并收集水凝胶上的外泌体。在这种情况下，你需要注意一些细节，以确保测量结果的准确性：1. 在测量前，需要将所有水凝胶上的外泌体充分释放。为此，可以使用一定浓度的洗涤缓冲液来洗涤水凝胶，以收集所有的外泌体。通常来说，需要多次洗涤，并将每次洗涤所得的上清汇总，用于后续的测量。2. 测量时，需要将每个时间点所得的上清进行分别测量。如果你想计算总释放量，可以将所有时间点的上清体积相加，但需要注意，不同时间点上清中的蛋白质含量可能不同，需要进行相应的校正

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问LNP-mRNA凝胶阻滞实验条带异常

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红色可能是存在污染，4℃时间后会有影响。

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蛋白凝胶电泳（上）

如果您正要开始进行蛋白质相关的研究，不知道怎么入手; 如果您需要用到蛋白凝胶电泳，却对其原理和应用不太熟悉；如果您想要了解各类凝胶电泳并灵活使用——Dr. 赛的这堂课定会对您有所帮助！

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凝胶电泳新纪元

凝胶电泳新纪元 —— 五分钟，从核酸片段到电泳结果从氯化铯梯度离心到今天普遍使用的离心柱，核酸纯化这一步我们走了近50年；而电泳技术发展至今已有近80年！80年之后，我们绝大多数的实验室仍在沿用早先的琼脂糖凝胶电泳或聚丙烯酰氨凝胶电泳用于核酸片段的分离，这一步我们可谓走得太久。 80年之后，你还在为核酸电泳而苦恼吗？繁琐的凝胶制备、恼人的EB、漫长的等待、歪歪扭扭的条带、复杂的分子量和浓度的计算 …… ？？？历经80年的发展，如今最前沿的核酸分析/分离平台已经可以让我们彻底摆脱

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凝胶纯化实验

本实验介绍凝胶纯化的方法。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。

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凝胶过滤层析实验

凝胶过滤层析（gel filtration chromatography）法又称排阻层析或分子筛方法，主要是根据蛋白质的大小和形状，即蛋白质的质量进行分离和纯化。层析柱中的填料是某些惰性的多孔网状结构物质，多是交联的聚糖类物质，使蛋白质混合物中的物质按分子大小的不同进行分离。

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凝胶电泳实验

甲基乙二胺（TEMED)Safety Coat Non Toxic Glass Plate Coating（注意：易燃）2. 酶和酶缓冲液3. 核酸和寡核苷酸方案 2 中的 PCR 产物（放射性）4. 凝胶（1）含 10% 甘油的 SSCP 凝胶混合物（终％C=2.67%)10XTBE 50 ml40% 丙烯酰胺 (37.5:1) 75 mlddH2O 325 ml用 0.45um 的 ZapCap 口过滤

操作方法所属实验：凝胶电泳实验

凝胶电泳法

1. 制备凝胶: 琼脂糖浓度1 . 2% , 加入5×甲醛凝胶电泳缓冲液和甲醛, 使两者的终浓度分别为1×甲醛凝胶电泳缓冲液和2.2 mol/ L;2. 取一定量的RNA 样品, 加入5 × 甲醛凝胶电泳缓冲液2 . 0 μl , 37%甲醛3 . 5 μl , 去离子甲酰胺10 . 0 μl , 稍微离心混匀后置65 ℃水浴15 min , 然后迅速置于冰浴中5 min; 加入2 . 0 μl 加样缓冲液, 稍微离心;3. 上样前, 凝胶在1 × 甲醛凝胶电泳缓冲液预电泳5 min

操作方法所属实验：甲醛变性凝胶电泳鉴定 RNA 实验