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照相、凝胶干燥

最新修订时间:

材料与仪器

丙烯酰胺单体贮液 Tris-甘氨酸缓冲液贮液 电极缓冲液 样品缓冲液 过硫醆铵 浓缩胶缓冲液贮液 分离胶缓冲液贮液

步骤

为了发表文章和分析结果的保存,应将有价值的结果在干燥以前先进行照相,以免在干燥时降低分辨率,甚至失去弱带。

凝胶可直接放在带有乳白色屏幕的发光板上,使用细颗粒的全色胶卷和一个中红滤片照相,以增加蛋白带和背景的反差。

虽然平板凝胶可存放在含有 7% 醋酸的密封的塑料袋中。但是即使如此也只能保存 1~3 个月,且占有空间太多,不易保管。

凝胶干燥目前有两种方法,厚度大于约 1.0 mm 的凝胶为防止日后凝胶的龟裂,应该用凝胶干燥仪进行干燥。厚度小于 1.0 mm 的凝胶则可采用自然干燥法。

采用凝胶干燥仪干燥。一个好的凝胶干燥仪应有足够大的尺寸,内装加热器和定时器,能抽真空。根据进一步处理的需要,可将凝胶干燥在支持膜上或滤纸上。前者透明,后者不透明。

随着电泳技术的不断发展,薄层平板凝胶正在替代厚胶。在凝胶干燥保存这一点上,薄胶也体现了它的优点。不需要用凝胶干燥仪,采用自然干燥方法也可以长期保存而不会龟裂。通常将凝胶浸泡在用脱色液配制的 3%~10% 的甘油溶液中约半小时左右,视凝胶的 pH,浓度和厚度而定。将带有支持膜的凝胶晾在平板玻璃上室温过夜(待凝胶发黏便可,时间视当地的温、湿度而定 ), 用保存液浸湿过的玻璃纸或一块透明的塑料膜包在凝胶上,晾干,以上操作避免陷入气泡。如果在上面再压一块玻璃,可使干燥后的凝胶更平整,但会延长干燥时间。对没有支持膜的凝胶在保存液中浸泡后,先将凝胶铺在塑料膜上,再用保存液浸湿的玻璃纸包裹,组成 “三明治”,再用玻璃板压紧,晾干。

来源:丁香实验

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