凝胶过滤层析实验

蛋白质实验

最新修订时间：2022-10-10

简介

凝胶过滤层析（gel filtration chromatography）法又称排阻层析或分子筛方法，主要是根据蛋白质的大小和形状，即蛋白质的质量进行分离和纯化。层析柱中的填料是某些惰性的多孔网状结构物质，多是交联的聚糖类物质，使蛋白质混合物中的物质按分子大小的不同进行分离。

来源：丁香实验

操作方法

蛋白质的凝胶过滤分离

1. 如果凝胶过滤的介质是干粉，则需在凝胶过滤缓冲液中完全溶胀。 2. 在远离过往通道及直接光照的恒温环境，将层折柱垂直安装在稳固的实验室支架上。 3. 用一注射器将凝胶过滤缓冲液从柱子的输出管注入柱子，至缓冲液达到柱子支持体平面之上，注射器留在输出端以堵住柱子。 4. 沿着一根顺柱子内壁而放的玻璃棒将凝胶混悬物倒入柱子至所设高度，再小心往凝胶顶部加入1 cm 高的一层缓

凝胶过滤层析实验（GFC）

以 100ml 的柱体积实验为例1、先用去离子水将 AKTA 纯化仪、柱子冲洗干净。2、用 2 个柱体积 Buffer 平衡柱料。3、上样：以流速 1±0.2ml/min 的速度上样。4、再用 Buffer 以流速 1±0.2ml/min 的速度进行冲洗。5、在 AKTA 纯化仪检测下，当紫外吸收值开始上升时收集洗脱下来的目的蛋白，当紫外吸收值下降至不再变化时停止收集。6、检测洗脱液中蛋白浓度,参