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请教纤维素酶活测定,滤纸酶活(FPAase)

相关实验:纤维素酶活力的测定

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桃子UAZQ

按文献方法,加柠檬酸缓冲液以及滤纸条,然后做空白管是把酶液灭活(沸水加热10分钟)加进去的,或者先加DNS再加灭活酶液,但这样做得出的FPA酶活都很低,空白管的也有显色(跟样品管的颜色很接近)请教做过的人能够指点迷津啊


CMC酶活显色和空白管都有差别,滤纸酶活却没变化

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3 个回答

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

考虑没有灭活完全,酶仍存在活性。

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桃子UAZQuser-title

100度沸水浴了10分钟,还能怎么灭活呀

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sswei

有帮助

纤维素生存温度比较难以控制。微生物一般所产生的纤维素温度如果低于26℃,并且高于35℃纤维素酶会直接失去活性的,主要是因为外切β-葡聚糖酶,还有内切β-葡聚糖酶以及β-葡萄糖苷酶等构成的,在正常室外温度下难以保持这个正常温度,因此就导致通常情况下活性低的原因。

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loveliufudan

有帮助

纤维素酶活测定是一项复杂的实验技术,可能会受到多种因素的影响。以下是一些可能导致你所描述的问题的原因以及相应的解决方法:

柠檬酸缓冲液和滤纸条的pH值不正确。这可能导致酶活性受到抑制或降低。请确保制备柠檬酸缓冲液和滤纸条时,pH值符合所需的实验条件,并在实验过程中检查pH值是否保持恒定。

酶液灭活不彻底。酶液未被完全灭活可能会影响空白管的结果。请确保将酶液彻底灭活,例如使用高温灭活法(100°C,10分钟),以确保酶液中的酶活性被完全破坏。

DNS显色反应不准确。DNS显色反应是检测纤维素酶活性的关键步骤。如果DNS显色反应不准确,那么可能导致实验结果不准确。请确保DNS显色反应的反应时间、反应温度和反应pH值符合所需的实验条件,并且在反应过程中控制样品和空白管之间的反应时间一致。

酶液浓度太高或者太低。如果酶液浓度太高或太低,那么可能导致实验结果不准确。请根据实验条件调整酶液的浓度,以获得最佳的实验结果。

实验操作不规范。如果实验操作不规范,那么可能会导致实验结果不准确。请仔细阅读实验方法,确保实验操作规范,如实验过程中保持操作环境卫生、工具清洁等。


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