纤维素酶酶活的测定方法

问：因我做的是非淀粉多糖酶制剂方面的课题，中间要测纤维素酶的活性，我用了两种方法测，但测的结果还是与标定的酶活性有很大的差距，不知道问题出在那里？请高人指点！

答：酶活性可分为全活性和比活性两种。酶的全活性为每克干物质每分钟释放的相应糖的微摩尔（µmol)数 , 单位为µmol/gDM min。酶的比活性为每毫克蛋白每分钟释放的相应糖的微摩尔（µmol)数，单位为µmol/gProtein min。以下是我用过的方法：

全活性：取4支15ml试管，每支试管中加入1.5 mL.39℃预热的2%羧甲基纤维素钠(内含0.1 mg/mL硫柳汞)，其中1号试管为试剂空白，加入0.01 M，pH6.8磷酸钠缓冲液1 ml; 2号试管为酶样空白，什么也不加;3,4号试管为酶样平行样，各加入1 ml酶液，4支试管同时放入39℃水浴回旋震荡培养60 min。培养后4支试管立即加入3 mL DNS (3,5-一硝基水杨酸溶液)，再在2号试管中加入1 ml预先制备好的酶液，用旋涡震荡仪混匀后在开水浴中煮沸5 min，取出后用水冷却5min。以1号试管为空白，在紫外分光光度计上560 nm处进行比色。

以D-葡萄糖作为标样，葡萄糖标准曲线的绘制：称取无水葡萄糖1.00g，溶于100 mL容量瓶中，制成浓度为10 mg/mL葡萄糖溶液，再从中依次吸收1，2，3，4，5，6 ml各溶于100 mL容量瓶中，制成浓度为0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6 mg/mL溶液，吸取1.0 mL葡萄糖溶液加入3 mL DNS,煮沸5 min，冷却5 min于560 nm处比色，绘制标准曲线。

比活性：用考马斯亮蓝法确定酶液的蛋白浓度，使用牛血清白蛋白做标样。其他的与全活性相同。