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做敏感蛋白质盐析后 需复原时,经常无法复原,有何注意点。
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注意蛋白质盐析后保管的环境,避免受热、紫外线、 X 射线、强酸、强碱、重金属(如铅、铜、汞等)盐、一些有机物(甲醛、酒精、苯甲酸)等。
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复原时需要掌握好温度和时间,可以提高复原率
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以下是在进行盐析复性时需要注意的一些建议:
1. 使用适量的缓冲液:在复性过程中,应使用足够的缓冲液,以便完全稀释蛋白质溶液中的盐分。通常,缓冲液的体积应该是盐析后蛋白质溶液体积的1.5至2倍。
2. 选择合适的缓冲液:选择一种适当的缓冲液进行复性至关重要。缓冲液的pH值和组成应与目标蛋白质的生物学条件相似,以保持其天然结构和活性。
3. 逐渐稀释:避免直接将蛋白质溶液与高浓度的缓冲液混合。而是先将蛋白质溶液与少量缓冲液混合,然后缓慢加入更多的缓冲液。这样可以避免蛋白质在短时间内经历过大的盐浓度变化,导致其聚集或沉淀。
4. 缓慢搅拌:在整个复性过程中,缓慢搅拌蛋白质溶液。这可以帮助蛋白质与缓冲液充分混合,使其与盐分充分接触并逐渐稀释。同时,搅拌也有助于防止蛋白质在复性过程中聚集或沉淀。
5. 避免反复冻融:在复性过程中,尽量避免对蛋白质样品进行反复冻融。反复冻融可能导致蛋白质降解或聚集,影响复性效果。
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复原一般是使蛋白质重新溶解,复原时需要注意掌握加入溶剂的量。
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做敏感蛋白质盐析后需复原时经常无法复原,要注意复性前后均要离心
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1。首先要获得较高纯度的包涵体
2。包涵体溶解要彻底,一般应使溶解液体量较大,不要怕蛋白被稀释,要有助溶措施