请问平板细胞克隆实验，一个孔铺多少细胞，如何给药

平板克隆形成实验方法简单，适用于贴壁生长的细胞。适宜底物为玻璃的、塑料瓶皿

实验成功的关键是细胞悬液的制备和接种密度。细胞一定要分散得好，不能有细胞团，接种密度不能过大。

数据分析

显微镜下观察阳性克隆，即每个克隆>50个细胞，相机拍照，数克隆数（大小约在0.3-1.0 mm）计算克隆形成率，并统计克隆大小

一般铺板24-48h之后进行给药。

在细胞克隆实验中，药物对结肠癌细胞的抑制作用通常会通过评估细胞生长、存活和凋亡等方面来衡量。以下是一些建议：

1. 铺细胞的数量：根据细胞类型和生长速度，铺细胞的数量可能会有所不同。一般来说，在6孔板中铺2000-5000个细胞是一个比较合适的范围。可以先铺一个中等数量的细胞（如3000个），然后观察细胞的生长情况，根据需要调整细胞的数量。

2. 给药时间：给药的时间取决于实验设计和目的。如果你希望了解药物对细胞生长周期的影响，可以在细胞铺板后24-48小时开始给药，这通常可以让细胞进入对药物敏感的周期。如果希望评估药物对细胞存活和凋亡的影响，可以在铺板后24-72小时开始给药。

3. 给药方式：关于给药方式，有以下两种常见的策略：

a) 持续给药：将细胞与药物一起培养一段时间（例如3-7天），然后取出细胞进行相关实验（如MTT、CCK-8等）以评估药物对细胞生长的影响。这种方法可以模拟体内长期给药的情况，但需要注意的是，长时间与药物接触可能会对细胞产生一定的毒性，从而影响实验结果。

b) 给药一次：将细胞与药物一起培养一段时间后（例如24-48小时），取出细胞，然后进行相关实验。这种方法可以评估药物对细胞生长的急性影响，但可能无法完全模拟体内长期给药的情况。

在实验设计时，可以根据实际需求和目的选择合适的给药方式和时间。

1. 一个孔铺多少细胞合适

细胞克隆实验中孔内细胞数应该适中，太少细胞不易形成克隆，太多细胞会导致克隆间相互影响，影响实验结果。一般情况下，每个孔内宜铺10-100个细胞，可以根据不同细胞类型和实验要求适当调整。

2. 什么时候开始给药

一般情况下，细胞克隆形成后再开始给药。一般克隆形成需要1-2周时间，可以在克隆形成后的第3-5天开始给药。

3. 是持续给药几天还是给药一次然后就不用管了

药物的给药方式和时间需要根据实验设计确定。可以根据药物的特性和细胞对药物的敏感度不同，选择持续给药几天或者给药一次就不用管了。一般药物的给药时间需要进行优化验证，以确定最佳的给药时间和剂量。

这种细节的问题，每个实验室都不同，建议还是查看一下文献和咨询师兄师姐，看你要做的研究目的来确定

1、6孔细胞培养板铺入细胞，0.4X106个/孔。

2、铺板第二天加药处理。

3、铺满细胞后，加药培养两周，可见白点克隆时停止培养，用遇冷的甲醇固定细胞15min，结晶紫染色30分钟，用流动水清洗。

6孔板培养板中一般接种400-1000个细胞/孔。

6孔板每孔种1.undefined10^6细胞量。

于6孔板培养板中各实验组接种400-1,000个细胞/孔（根据细胞生长情况确定，一般为700个细胞/孔，每孔加入结晶紫染液1ml，染细胞10-20 min；