细胞铺板：如何铺的均匀？

做细胞生物学实验，细胞铺板大概是最常见的一个实验了。但是有很多人不是很得要领，铺得不是均匀： 要么中间密周围稀，要么周围密中间秃顶。现分享我的实验技巧。

一般 96 孔板我每孔是加 100 微升细胞悬液，从孔的左边靠近底部加入。加完半边板后，将未加的细胞悬液混一下，再继续加剩余的半边板子。都加完后盖上盖子，左手轻轻扶住板的左边，右手轻轻敲击板的右边缘。

注意把握力度（我一般轻巧敲三下），太强或次数太多会导致细胞集中成堆，将板顺时针旋转（逆时针效果不好），依次敲击剩余三个边，静置约 5 分钟，放入 37 度培养箱。

6 孔板、12 孔板或 24 孔 板，我均采用将第一个孔加入少量无血清培养基，晃动浸润整个孔底。然后用移液枪吸至第二孔，同样方法浸润孔底。其它孔依此类推，这样整个孔底都是湿润的，细胞悬液会平铺在整个孔底。

加细胞悬液的时候可以避免加在中间中间细胞多，而加在周边晃匀后周边细胞多中间少的现象，细胞分散较均匀，注意加完细胞悬液后要放工作台静置一下。

这个方法就是有点慢，但操作熟练了也不慢。也可以采用轻拍的方式，但力度没有 96 孔板好掌握，效果没有 96 孔板好，所以我放弃改用浸润孔底的方法。

细胞悬液加完后，将细胞培养板抬高，对着灯光，从底部往上看，看细胞有没有抱团。然后从底部敲击，使之分散。

如果实验室有平板振荡器的话，我建议用这个仪器稍振荡一下，效果不错，就是振幅小，频率高的那种。

细胞要尽量打散，大部分呈单个状态。离心后，要充分悬浮！还有转移到六孔板后，是要晃得。晃的时候最好不要让那个细胞液转圈，不然细胞就全被带到中间去了，就会不均匀。

一瓶细胞长满后，正常处理，在培养瓶里吹匀。然后铺 6 孔板，每孔 2 毫升，铺完之后不用观察直接用酒精棉擦拭。然后放到培养箱里，轻微的左三圈、右三圈、前三圈、后三圈。基本上 24 小时之后观察 每孔的细胞都会很均匀。

计算好所需要的全部液体量和细胞量，混匀后，加到六孔板里，六孔板按横 8 字型晃。显微镜下观察，如果不均匀，按上述方法再晃。如果细胞未计数直接种的话，在种六孔板的过程中，随时晃一下混匀用的瓶子，瓶子我通常是顺时针或逆时针转圈。