pcr的原理是什么呀 有可以详细讲解一下的嘛

在存在DNA模板、引物、dNTPs、适当缓冲液 (Mg2+) 的反应混合物中，在热稳定DNA聚合酶的催化下，对一对寡核苷酸引物所界定的核酸片段进行扩增，这种扩增是以模板DNA与引物之间的变性、退火、延伸三步反应为一个周期，循环进行，使目标DNA片段得以扩增。

PCR是一种在试管中进行的DNA复制反应，其基本原理是依据细胞内DNA半保留复制的机理，以及体外DNA分子于不同温度下双链和单链可以互相转变的性质。PCR利用DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸等步骤，在体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。PCR全过程每一步的转换是通过温度的改变来控制的。PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。

PCR的原理是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。

PCR最有价值的应用领域就是对感染疾病的诊断。理论上，只要样本有一个病原体存在，PCR就可以检测到。

在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，加入设计引物，DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。

但是，DNA聚合酶在高温时会失活，因此，每次循环都得加入新的DNA聚合酶，不仅操作烦琐，而且价格昂贵，制约了PCR技术的应用和发展。

PCR(聚合酶链式反应)的原理是:利用DNA聚合酶在特定温度条件下对DNA模板进行扩增,从而达到快速产生大量特定DNA片段的目的。

PCR主要包括以下步骤:

1. 模板DNA双链分离。通过高温将双链DNA分离成单链,供引物和聚合酶识别。

2. 降温以使引物与模板DNA的互补位点杂交。引物是一段短的单链DNA,可以与模板DNA的互补序列特异性杂交。

3. 聚合酶延伸引物。DNA聚合酶识别引物的3'端,并沿着模板DNA的互补链合成新的DNA 链以延伸引物。

4. 再度提高温度分离双链。形成的新链与模板链的双链DNA再次分离成单链,为下一轮PCR循环做准备。

5. 重复步骤2-4,进行多个PCR循环。每一轮PCR可以将DNA的量增加2倍,30个循环可达到约10亿倍的增幅。

采用PCR需要DNA聚合酶、引物、DNA模板、四种混合脱氧核苷酸和缓冲液。其中DNA聚合酶和引物是PCR的核心成分。DNA聚合酶负责在引物和模板的指导下合成新DNA链。引物则决定了要扩增的DNA片段的起始位置和方向。

PCR的特点是快速、高效、高度特异性和灵敏度。它的发明为生物学研究和应用带来革命性变化,在基因检测、鉴定、基因工程和基因治疗等领域产生深远影响。利用PCR不仅可以快速扩增微量DNA,也可以在其中引入突变以产生重组DNA,这为分子生物学的许多技术提供了基础。

PCR是一项极为重要的技术,其原理和应用都是分子生物学研究的基石。熟练掌握PCR的原理和实践有助于我们理解许多基础生物技术和理论。