细胞实验中经常出现的问题有哪些？怎样规避？

在细胞实验中，常见的问题包括：

1. 细胞污染：细胞污染可能是由细菌、真菌、酵母或其他细胞类型的污染引起的。为了规避这个问题，建议在实验开始前进行无菌技术操作，使用无菌培养器具和试剂，以及经常监测和检查细胞的无菌性。

2. 细胞死亡：细胞在培养过程中可能会出现死亡，可能是由于细胞培养条件不适宜、细胞老化或药物毒性等因素引起的。为了避免细胞死亡，应该选择适当的培养基和培养条件，并且定期检查细胞的健康状态。

3. 实验重复性差：实验重复性差可能是由于操作不一致、实验条件变化或实验误差等原因引起的。为了提高实验的重复性，建议严格控制实验条件，尽量保持一致的操作流程和实验环境，并进行适当的质量控制。

4. 实验设计不合理：实验设计的不合理可能导致实验结果的解释困难或无效。为了避免这个问题，应该在进行实验之前充分了解实验目的，设计合适的对照组和实验组，并确保样本数量足够以提高统计学的可靠性。

5. 数据分析错误：错误的数据分析可能导致错误的结论。为了规避这个问题，建议使用适当的统计方法进行数据分析。

主要是细胞污染，可以规范自己的无菌操作，定期打扫培养箱来避免

经常出现的问题就是培养细胞的污染，规避办法就是时刻注意无菌原则的，一定不能省事的。再有就是记录每一步的实验步骤，这样才能复盘自己的实验，找到失败的原因。

经常出现细胞培养过程中被污染，规避方法就是尽量无菌操作，避免外界污染

细胞培养常见问题分析：

1、细胞死亡的可能原因：

A：如果是污染，最可能的是支原体，一般在培养两周左右细胞基本全部死亡；

B：血清浓度：大于15%培养液即偏黄；

C：CO2是否不足；

D：细胞传代次数过多，细胞老化；

2、PH变化快的原因：

A：二氧化碳张力不对；

B：培养瓶塞拧得太紧；

C：缓冲体系缓冲力不足；

D：培养液中盐浓度不正确；E：.细菌、酵母、真菌等污染

3、冷冻管应如何解冻：

取出冷冻管后， 须立即放入37 ℃水槽中快速解冻， 轻摇冷冻管使其在1 分钟内全部融化， 并注意水面不可超过冷冻管盖沿， 否则易发生污染情形。

另冷冻管由液氮桶中取出解冻时， 必须注意安全， 预防冷冻管之爆裂

4、细胞冷冻管解冻培养时， 是否应马上去除DMSO：

除少数特别注明对DMSO 敏感之细胞外， 绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞）， 在解冻之后， 应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中， 待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO 即可， 如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。

5、可否使用与原先培养条件不同之培养基？

不能，每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基， 若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基， 细胞大都无法立即适应， 造成细胞无法存活

6、培养基中是否须添加抗生素？

除于特殊筛选系统中外， 一般正常培养状态下， 培养基中不应添加任何抗生素。

7、欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速？

回收动物细胞， 其离心力约为300xg (约1000RPM)，5 - 10 分钟， 过高之转速， 将造成细胞死亡.

8、应如何避免细胞污染？

细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之最好方法，选择的CO2培养箱最好具有高温消毒功能，一旦出现污染马上可以进行彻底消毒，市面上有90℃高温湿热灭菌型，如HF90培养箱，还有另外一种高端型180℃高温干热灭菌培养箱，如HF180 二氧化碳培养箱。