人体鼻咽癌细胞（C666-1)怎么样才能让它贴壁更好，消化时间大概在多少，才能让细胞不聚团

这种细胞建议消化时间在3-5分钟。

消化时间每个牌子胰酶时间不一样，要根据说明书来使用

可以考虑用赖氨酸或明胶包被培养皿或瓶，细胞贴壁更好。消化时间宜短不宜长，没有参考经验的话可以每隔一分钟拿出来镜下观察一下，这样好一点，消化过久了对细胞损伤比较大

贴壁人鼻咽癌细胞，可参考以下方法：

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗人鼻咽癌细胞1-2次。

2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4.将人鼻咽癌细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3）人鼻咽癌细胞冻存：待人鼻咽癌细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。

建议使用一次性培养瓶进口的最好，可以让贴壁效果更好，再就选择培养基血清培养基能使细胞更好的贴壁。至于怎么让细胞不聚团：可以低密度传代，选择适当的离心转速和时间离心聚团细胞。

有以下几个可能的建议：

1. 培养条件：C666-1细胞通常在RPMI 1640培养基中培养，该培养基应含有10%的胎牛血清（FBS），并且应在37°C，5% CO2的条件下培养。保证适合的环境和营养供应是让细胞更好地贴壁的关键。

2. 种植密度：开始时的种植密度也会影响细胞的贴壁和生长。如果密度过低，细胞可能会难以贴壁和增殖；如果密度过高，细胞可能会过度拥挤并形成聚团。

3. 细胞消化：对于细胞的消化，一般使用0.25%的胰酶-EDTA溶液。消化的时间取决于细胞的种类和状态，通常需要观察细胞在显微镜下的形态来判断消化的情况。当细胞边缘开始收缩，细胞间的连接开始断裂，但细胞本身仍然保持圆形，这时就可以停止消化。过度的消化可能会损伤细胞，导致细胞贴壁困难。

4. 处理细胞聚团：如果在消化后细胞仍然形成聚团，可以尝试通过轻轻的吹打来分散聚团。还可以通过过滤，例如使用70微米的细胞过滤器，来去除大的细胞聚团。但要注意的是，过滤可能会对细胞造成一定的机械伤害。

消化一般20-30min，添加血清可以辅助贴壁