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PCR产物跑胶,产物堵在了孔里是怎么回事呀 所有的情况都试过了,还是堵在孔里.?

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土井挞克树

PCR产物跑胶,产物堵在了孔里是怎么回事呀 所有的情况都试过了,还是堵在孔里.?

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3 个回答

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sswei

有帮助

可能是因为DNA产物与酶进行结合了,导致堵在胶孔里跑不下来,可以加一点SDS然后再跑胶图,就可以分开了,就不会堵在胶孔里了。

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balalaLy

有帮助

琼脂糖凝胶没有凝好或着样品中混入了杂质

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loveliufudan

有帮助

如果PCR产物在跑胶过程中堵在了孔里,可能有以下几个可能的原因:

1. PCR产物浓度过高:高浓度的PCR产物可能在跑胶过程中堵塞孔口,尤其是较小的孔。请尝试减少PCR产物的量,稀释样品,或降低PCR循环数以减少产物浓度。

2. 孔口堵塞:孔口可能被胶体颗粒、残留琼脂糖胶或其他杂质堵塞。确保在装载样品到凝胶孔中时避免气泡和杂质的进入。清洗凝胶孔或更换凝胶,确保凝胶孔干净。

3. 引物设计问题:请确保引物的设计是特异性的,避免非特异性扩增或产物的剪切重组。重新设计引物,确保其特异性和可靠性。

4. 增加堆载缓冲液:在装载PCR产物到凝胶孔时,使用足够的堆载缓冲液,以确保产物可以顺利进入孔中,而不被堵塞。

5. 凝胶条件优化:优化凝胶电场条件,包括电场强度和运行时间。这有助于产物在凝胶中迁移得更顺利。

如果您已经尝试了上述措施,但PCR产物仍然堵塞在凝胶孔中,可以考虑尝试其他凝胶类型(如聚丙烯酰胺凝胶或聚酰胺凝胶)或其他分离方法(如毛细管电泳)。

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