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甲醇氯仿法提蛋白怎么测浓度?

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陈小橙L

使用甲醇氯仿法提出来的蛋白,烘干后要用什么溶解?去测蛋白浓度呢?不然内参跑不齐

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4 个回答

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huarenqiang5

有帮助

烘干后可以使用尿素溶液进行溶解来测蛋白浓度。

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sswei

有帮助

用1%SDS,溶解,可以37℃加热30min。

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陈小橙Luser-title

加热不久变性了

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loveliufudan

有帮助

在使用甲醇氯仿法(methanol/chloroform method)提取蛋白质后,通常会使用一种溶解液来溶解干燥的蛋白质沉淀。常用的溶解液是含有蛋白质的生理盐水(如磷酸盐缓冲液或Tris缓冲液)。以下是一种常见的步骤:

1. 将干燥的蛋白质沉淀取出,加入适量的溶解液。溶解液的体积取决于你需要的最终蛋白质浓度和使用的浓缩倍数。

2. 使用旋转振荡器或轻轻摇动样品,使蛋白质溶解。

3. 可以考虑在溶解液中添加一些蛋白质稳定剂(如BSA)来保护蛋白质的稳定性。

4. 将样品离心以去除任何残留的沉淀。

蛋白质浓度可以使用多种方法测量,其中包括:

1. Lowry法:这是一种经典的蛋白质浓度测量方法,使用酸性染料与蛋白质结合生成可检测的复合物。

2. Bradford法:这是一种常用的快速和相对灵敏的方法,基于酸性染料(Coomassie Brilliant Blue G-250)与蛋白质之间的相互作用。

3. BCA法:这是一种通过还原铜离子与蛋白质中的蛋白质酸和肽键发生反应形成紫色化合物的方法。

4. 280 nm吸光度法:如果你已知蛋白质的摩尔吸光系数,你可以通过测量280 nm处的吸光度来估算蛋白质的浓度。

在进行蛋白质浓度测量时,可以准备一系列浓度已知的蛋白质标准溶液,以便构建标准曲线来确定未知样品的蛋白质浓度。请注意,在测量蛋白质浓度之前,确保你的样品完全溶解,并消除任何可能干扰测量的污染物或溶剂残留。

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灵枢天问

有帮助

用你的裂解液溶解,然后测浓度。

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陈小橙Luser-title

裂解液会不会溶解不完全

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