实验室已构建好的质粒怎么克隆扩增啊

要克隆扩增已构建好的质粒，一般需要进行以下步骤：

选择适当的限制性内切酶将质粒线性化。这可以通过在限制性内切酶反应体系中将质粒加入并加入相应的限制性内切酶来完成。

准备DNA片段，可以通过PCR扩增、限制性内切酶切割等方法获得。DNA片段需要和质粒上的限制性内切酶切口互补配对。

将线性化的质粒和DNA片段进行连接。这可以通过DNA连接酶进行连接。

将连接后的混合物进行转化到适当的细菌中。可以通过热激转化、化学转化、电转化等方法将混合物转化到细菌中。

进行筛选和鉴定。通过对转化后的细菌进行筛选和鉴定，确定是否获得了目标克隆产物。

扩增步骤

1.取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；

2.加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min；

④6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上；

⑤将平板正向培养1h，再倒置37℃培养14h。如果要求是30度则培养20h；

⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h

质粒扩增步骤:

细菌铺板：让细菌在LB培养基上生长，培养基上为了防止杂菌生长，会加入抗生素，而含有目标质粒的细菌带有抗生素的抗性，能够正常生长，从而保证板子上长出来的会是目标菌落。

挑选菌落：从LB培养基上挑选菌落备用

细菌培养：将挑好的菌落放到大肠杆菌培养液当中，并于37摄氏度培养箱中以250rpm摇动8~12h，使大肠杆菌繁殖

裂解抽提：采用细胞裂解的方式，从含目标质粒的大肠杆菌菌液中将质粒提取出来