hudabao
参照gut的文献,使用0.05%胶原酶+0.02%链霉蛋白酶+0.1%DNA酶I,37度消化20分钟;过滤HBSS淘洗2次使用 Nycodenz分离;下层 28.7%Nycodenz/GBSS溶液-5ml;中层 13.2%Nycodenz/HBSS细胞混悬溶液-6.5ml;上层DMEM 2ml。为什么感觉我的PSC 分离不开啊!!!求大佬指导!!感谢
毛利小五郎的徒弟
可以增加消化酶的浓度或者延长消化时间
loveliufudan
有以下几种可能性:
消化条件不够理想:消化的时间、酶的浓度等消化条件可能需要进行优化。建议您可以尝试不同浓度的胶原酶和链霉蛋白酶,或者改变消化时间来优化消化条件。同时,确保在消化过程中将样品充分均匀地混合和摇动。
操作不当:在消化和分离过程中,操作的技巧和注意事项也会影响到PSC的分离效果。例如,如果离心时间、离心速度、离心温度或分离过程中离心管位置不正确,都可能影响到PSC的分离效果。因此,请确保您的操作符合标准操作程序,并根据实际情况适当调整。
细胞存活率低:在消化和分离过程中,可能会影响到星状细胞的存活率,如组织处理不当、过度消化等。请确保组织样品的新鲜度和质量,并尽可能减少对细胞的损伤。另外,在使用Nycodenz密度梯度分离时,使用过高的离心速度和时间可能会影响到细胞的存活率。
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