大鼠星型胶质细胞培养实验

一、实验步骤 1. 新生1-2 天Wistar大鼠乳鼠，经75%酒精消毒，断头处死。 2. 取脑放入冷的D-Hanks'平衡盐溶液，去除脑膜及大血管。 3. 分离两侧大脑皮质并剪成1mm3大小，加入0.25%胰蛋白酶37℃空气浴震荡消化10 min。 4. 用含10% FBS的DMEM培养基终止消化，离心(1 000 rpm，10 min)，去上清。 5

一、 取14.5d SD大鼠一只。二、 苯巴比妥0.5 ml 腹腔注射，待麻醉后置于手术台上，酒精棉球消毒皮肤，开腹取出子宫（约12-14个），放入解剖液中，剖开子宫，取出胚胎，放入解剖液中，在耳眼之间离断，取头侧部组织，去除脑膜组织，取原始中脑区组织，放入离心管装的解剖液中，待全部取出后，1500转2分钟。三、 用吸管吸出上清液，在组织细胞沉淀中加入胰蛋白酶一管（1 ml/vial），室温30分

一、分离大鼠胚胎（16-18周）新皮层，置于L-15（或Hank's平衡盐/DMEM溶液，无Hepes）培养基中，除去脑膜和血管、海马、尾核和其他非皮层组织。二、 用解剖刀将其切成1 mm3大小的组织块。三、用1ml枪头转移250 ul胶原酶储存液（1.33%，溶于L-15中）到1 ml的L-15（或D-MEM）中。每2只鼠脑组织块使用1-1.5 ml稀释胶原酶液。四、37℃水浴中孵育30 min