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简介
来源:丁香实验
操作方法
一、实验步骤 1. 新生1-2 天Wistar大鼠乳鼠,经75%酒精消毒,断头处死。 2. 取脑放入冷的D-Hanks'平衡盐溶液,去除脑膜及大血管。 3. 分离两侧大脑皮质并剪成1mm3大小,加入0.25%胰蛋白酶37℃空气浴震荡消化10 min。 4. 用含10% FBS的DMEM培养基终止消化,离心(1 000 rpm,10 min),去上清。 5
胰酶消化法一、 取14.5d SD大鼠一只。二、 苯巴比妥0.5 ml 腹腔注射,待麻醉后置于手术台上,酒精棉球消毒皮肤,开腹取出子宫(约12-14个),放入解剖液中,剖开子宫,取出胚胎,放入解剖液中,在耳眼之间离断,取头侧部组织,去除脑膜组织,取原始中脑区组织,放入离心管装的解剖液中,待全部取出后,1500转2分钟。三、 用吸管吸出上清液,在组织细胞沉淀中加入胰蛋白酶一管(1 ml/vial),室温30分
胰蛋白酶消化法一、分离大鼠胚胎(16-18周)新皮层,置于L-15(或Hank's平衡盐/DMEM溶液,无Hepes)培养基中,除去脑膜和血管、海马、尾核和其他非皮层组织。二、 用解剖刀将其切成1 mm3大小的组织块。三、用1ml枪头转移250 ul胶原酶储存液(1.33%,溶于L-15中)到1 ml的L-15(或D-MEM)中。每2只鼠脑组织块使用1-1.5 ml稀释胶原酶液。四、37℃水浴中孵育30 min