新生大鼠大脑皮层星形胶质细胞的原代培养

将出生2天以内的新生SD大白鼠10只，用75%的酒精浸泡消毒后，采用无菌方法迅速取出大脑，用冷的D-Hanks液清洗并剔除脑膜和血管，取大脑皮质，将组织剪碎为1mm3，用0.125%胰蛋白酶,37ºC消化10分钟，过滤（200目尼龙滤网），离心（1000rpm 10分钟）。

去上清，加入DMEM/F12完全培养基（其中含10%胎牛血清，10%马血清，L-谷氨酰胺2mmol/L，青霉素100u/ml,链霉素100μg/ml）制成细胞悬液。

计数后按5×105/cm2接种于培养瓶。贴附30min后，转移细胞悬液至新瓶中，加入DMEM/F12完全培养基，在37ºC, 5%CO2培养箱中培养9天（每3天更换培养液一次），第9天将培养瓶置于恒温旋转摇床上37ºC, 240rpm，摇18小时，去掉悬浮的细胞，用D-Hanks液清洗3次，进行传代培养即得纯化的星形胶质细胞。

经免疫细胞化学法检测，98%以上的细胞GFAP免疫反应为阳性。