MHCC-97h细胞越养，就越小，都缩起来了；还有HLE细胞养起来有什么技巧，经常吹不散

养HLE细胞技巧与方法:

传代密度 :细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养

传代比例 :首次传代建议1：2传代

传代方法:

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2.加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。

4.将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。

MHCC-97h细胞皱缩考虑是存在脱水，需要控制培养基的渗透压与细胞内一致，避免脱水

对于MHCC-97h细胞越养越小的情况，有可能是由于过度培养导致细胞进入凋亡状态，也可能是培养条件不适合细胞生长导致的。您可以尝试以下方法来改善细胞状态：

检查培养条件是否适合：包括温度、湿度、CO2浓度、培养液配方、培养瓶种类等，尽量让细胞在最适宜的条件下生长。

严格控制细胞密度：细胞密度太高容易导致营养物质和氧气供应不足，细胞过度接触也会导致细胞凋亡，建议将细胞密度控制在合适的范围内。

注意培养时间：过度培养也是导致细胞凋亡的主要原因之一，建议按照实验需要培养一定的时间就及时处理细胞。

对于HLE细胞的问题，吹不散可能是由于细胞聚集过多导致的，您可以尝试以下方法：

增加细胞洗涤次数：细胞洗涤可以去除培养液中的蛋白质、细胞碎片等，减少细胞聚集。

适当增加胰酶消化的时间：胰酶可以将细胞分散，如果吹不散可以考虑增加胰酶消化的时间。

调整培养条件：包括培养基配方、CO2浓度、温度等，适当调整可以改善细胞状态。