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不同导入原核受体细胞的方法: ①转化:把以质粒为载体,构建的重组分子导入受体细胞的方法。 ②转导:以噬菌体或真核病毒为载体构建的重组分子导入受体细胞的方法。 ③三亲本杂交:将含有重组DNA分子的供体菌,被转化的受体菌含有辅助菌,在辅助菌作用下,将供体菌导入到受体菌中。
不同导入真核受体细胞的方法: ①导入酵母中:对酵母进行转化的两种方法:a.细胞壁在CaCL2或多聚醇作用下,细胞壁具有穿透性,允许外源基因进入。b.用Li 盐进行处理,细胞能够允许外源基因进入。 ②导入植物中细胞中:主要采用致癌农杆菌制导下的以后Ti质粒为载体的,土壤杆菌诱发植物产生肿瘤进行转化的方法。 ③导入动物细胞中:a.物理、化学法b.生物法。
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外源基因进入细胞主要有四种方法:电击法、磷酸钙法、脂质体介导法和病毒介导法。
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主要有化学法,质粒转导法,病毒转导法。
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外源基因可以通过以下方法进入细胞:
转染:将外源基因通过物理或化学手段导入细胞内。物理转染包括电穿孔、微注射、冷冻脉冲等方法,化学转染包括使用阳离子聚合物、脂质体等。
病毒载体介导的转导:利用病毒作为载体将外源基因导入细胞内,常用的病毒载体包括腺病毒、腺相关病毒、冠状病毒等。
瞬时感电转移:利用电场将DNA通过细胞膜瞬间转移至细胞内。
基因枪:利用高压气枪将外源基因直接射入细胞内。
热激法:利用高温将外源基因直接导入细胞内。
纳米技术:利用纳米颗粒将外源基因导入细胞内,如聚乙烯亚胺纳米颗粒、金属纳米颗粒等。
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常用的就是质粒转染,包括磷酸钙和脂质体等转染试剂,此外还有慢病毒感染细胞以及电转等方式