求助小鼠颅骨成骨细胞提取
dxy_3en2kxp6
看了文献的方法，尝试了很多次，都提不出细胞。有没有大神可以指点指点，非常感谢。实验步骤如下，
新生小鼠颅骨成骨细胞的分离培养
1.斩首 20-30 只新生小鼠幼崽。
2.用乙醇喷洒消毒。
4.从脖子后部到鼻子的弧形切割皮肤。
5.用剪刀剪下颅盖骨，置于培养皿中。
6.刮掉颅盖上的软组织。
7.培养皿中加入含双抗的培养基清洗组织，重复3次。
8.用胰蛋白酶在37℃下孵育10分钟，重复2次。
9.用剪刀将颅骨碎成小块（1 mm3 块）。
10.加入消化液在37℃下孵育30分钟。
消化液：-α-MEM
- 0.2%Ⅰ型胶原酶
- 0.1 % trypsin/EDTA
11.换新鲜的消化液37℃下孵育60分钟。
12. 将溶液转移到15毫升管中。
13.在室温下以1,500×g离心细胞溶液5分钟。丢弃上清液并将细胞沉淀重悬于MEM中。
14.加入20毫升MEM至2个T75。
15.培养瓶孵育在37℃/ 5％CO2。
4 个回答
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你好，请问你成功提取出来了吗。
晴空a
目前常用的获取成骨细胞方法主要有：新生动物机械分离法、全骨髓诱导法、外周血/骨髓单核细胞诱导法和脾细胞诱导法。
毛利小五郎的徒弟
消化液首次消化时间可以减短点，另外可以添加裂解酶。
loveliufudan
以下是可能有帮助的建议：
在消化液的配制过程中，确保使用新鲜的胶原酶和胰蛋白酶/EDTA，以确保酶的活性。
在颅骨碎片消化期间，可以将消化液中的骨片悬浮，以便更好地消化组织。
确保消化时间的准确性，如果消化时间过短，则细胞可能无法从骨组织中释放出来，如果消化时间过长，则细胞可能被过度消化，影响细胞的健康和数量。
如果您在培养细胞时使用了含有双抗的培养基，可以尝试使用不含双抗的培养基来提高细胞的存活率和增殖率。
在分离和培养过程中，应该使用无菌的技术，并在培养期间经常更换新鲜的培养基。
最后，尝试调整实验步骤中的某些参数，例如消化液的浓度、时间和温度，以及细胞的离心速度和时间，以优化细胞的提取和培养。
