sswei
在没有酶促孵育的情况下,使用机械解离可以更好地得到星形胶质细胞。
三岁就爱笑的丫头
你可以去看一下文献,我之前查的时候有看过,好像是提高摇床的速度,而且需要传3代,以确保去掉神经元的部分,文献中会进行荧光检测,我们是觉得分离成功率不一定高,所以最终选择了直接从公司购买细胞
loveliufudan
可以采用两种方法去除神经元:机械分离法和差速离心法。
机械分离法:将组织块放入含有胶原酶和DNA酶的缓冲液中,进行酶解,然后使用细胞过滤器过滤,得到单细胞悬液。接着将细胞悬液在离心管中离心,取上层细胞悬液即为星形胶质细胞。
差速离心法:将组织块放入离心管中,使用梯度离心分离神经元和星形胶质细胞。具体来说,将组织块加入含有15%的葡萄糖的离心液中,进行离心,将上层液体倒出,并加入含有11%葡萄糖的离心液,再次进行离心。最后,将上层液体倒出,得到富含星形胶质细胞的沉淀。
除此之外,也可以采用商业化的星形胶质细胞纯化试剂盒,如Miltenyi Biotec的纯化试剂盒,可在不经过细胞传代的情况下快速、高效地纯化出星形胶质细胞。纯化后的细胞可以用于WB等测试。