冰冻切片组织脱水方式及时间如何确定

脱水：依以下酒精梯度进行脱水，30%乙醇→50%乙醇→70%乙醇（关键步骤：可当日2H也可过夜）→95%乙醇1→95%乙醇2→无水乙醇。

根据不同组织大小和类型调整脱水时间，对于小鼠肝组织95%乙醇控制在30min-1H，100%乙醇5min-30min。

可以选用乙醇和二甲苯进行脱水。

乙醇要从低浓度到高浓度依次进行，且不要在高浓度时间过久。研究表明乙醇脱水能力在60%-95%浓度之间是相对稳定，低于60%的乙醇脱水能力下降明显，初始乙醇浓度低于50%，会很快失去脱水效应。

在制备冰冻切片前，需要对取材的组织进行脱水处理，以去除其中的水分并使其适合于OCT包埋。一般情况下，脱水可以使用酒精、丙酮或二甲基亚硫酰胺（DMSO）等试剂。以下是一些常见的脱水方法：

酒精脱水法：将取材的组织依次浸泡在不同浓度的酒精中，通常是70%、80%、95%和100%的乙醇溶液，每次浸泡30分钟至1小时。酒精脱水法对于一般的组织类型都适用。

丙酮脱水法：将取材的组织依次浸泡在不同浓度的丙酮中，通常是50%、70%、80%、95%和100%的丙酮溶液，每次浸泡30分钟至1小时。丙酮脱水法对于一般的组织类型也适用，但可能会引起一些组织的变性和收缩。

DMSO脱水法：将取材的组织依次浸泡在不同浓度的DMSO中，通常是20%、40%、60%、80%和100%的DMSO溶液，每次浸泡30分钟至1小时。DMSO脱水法适用于一些较难脱水的组织类型，如脂肪组织。

需要注意的是，不同组织类型可能对脱水试剂的选择和浓度有所差异。以下是一些常见组织类型的处理建议：

硬组织（如骨头、牙齿）：由于硬组织比较难透过脱水试剂，需要较长的脱水时间和高浓度的试剂。常用的脱水试剂是酒精或丙酮，浓度可达100%。

软组织（如心肌、脑组织）：一般来说，软组织比较容易脱水，通常可以使用酒精、丙酮或DMSO等试剂进行处理。

脂肪组织：由于脂肪组织中含有较高的脂肪成分，不易透过酒精或丙酮等试剂。建议使用DMSO进行脱水，浓度逐渐增加至100%。

在脱水完成后，建议使用OCT等支持介质对组织进行包埋，以确保组织在切割时能够保持完整性。对于组织的包埋，可以使用手动或自动包埋机进行操作。包埋时需要注意将组织均匀地置于支持介质中，并迅速冷冻至-80℃。

需要注意的是，在脱水和包埋过程中，应避免组织受到外界因素的干扰和损伤。同时，不同组织类型对脱水和包埋的要求有所差异，因此需要根据具体情况进行调整和优化。建议在进行组织处理前，先了解一下不同组织类型的特点和处理方法，以确保最终得到高质量的冰冻切片。

可用30%蔗糖脱水48小时以上进行。