如何确定引物的OD数

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引物设计

1.引物的OD数如何定量?

答：引物合成 引物OD数是这样测定的：用紫外分光光度计 ，波长260nm，石英比色杯，光程为1厘 米，测定溶液的光密度。测定时溶液的光密度最好稀释到0.2-1.0之间。DNA干粉用一定体积的水充分振荡溶解以后，用1ml水稀释测OD值。需要根据 稀释倍数换算出母液的OD值。

2.需要合成多少OD数?

答：根据实验目的确定。一般PCR 扩增，2 OD引物，可以做200-500次50ul标准PCR 反应。如果是做基因拼接或退火后做连接，1 OD就足够了。但是有些研究人员，就做几次PCR，但是却要5-10 OD。做全基因构建的引物都比较长，但是我们有些研究人员也要求高OD数。片段越长, 最后全长得率就越低，出错的几率就越大。超出需要之外的OD数要求，其实也是对社会资源的一种浪费，同时也从一个侧面反映了部分研究人员，特别是新手的自 信心不足，总觉得需要重复多次才能成功。