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退火温度梯度如何确定？
浙123
求助求助PCR问题 引物的tm较小值为53.53，听了建议设了个梯度PCR 范围从50℃到56℃，发现50℃有浅浅的条带 所以昨天直接退火温度设的49℃ 但是没条带 是我还要在49℃到50℃之间设置梯度吗？
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3 个回答
高山云初
有帮助
退火温度确定的计算公式是：4×（G＋C）＋2×（A＋T）－（5～8）。退火温度一般设定比引物的Tm低5℃。
橙汁儿青柠味
有帮助
一般是采用tm值-5开始，然后以2°为梯度增加
sswei
有帮助
需要在49℃到50℃之间设置梯度
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