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条带模糊,我应该提高退火温度还是降低退火温度呀?我这次设置的温度是58℃ 这对引物的tm较小值为53.53

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浙123


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3 个回答

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高山云初

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电泳条带太浅或没有应该降低退火温度。

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浙123user-title

今天降低了两度用56℃的也没出来条带

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粥辰辰辰辰

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应该降低退火温度。电泳结果不理想,则可以考虑在退火过程中适当降低温度,以减少DNA条带的扩散,从而获得更好的电泳结果。

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浙123user-title

好像降低退火温度也没用诶 今天降低了两度试试跑了一下 根本跑不出来

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火温度是根据正反引物设计的。这种情况一般是需要降温的,但降温的同时会有非特异性扩增的。如果你的非特异性扩增很少,只是目的条带很弱的话,可以增加模板量,酶量,或者适当增加延伸时间试试。仅供参考吧

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