丁香实验_LOGO
登录
提问
我要登录
|免费注册

目前用Trizol法提取骨髓细胞RNA,浓度小的可怜,有没有什么提取RNA的好方法呀?或者说有没有什么改良法呀?

相关实验:细胞 RNA 含量样品的制备及分析

user-title

这研非上不可吗

一百万个细胞到最后只有几十的浓度,这是正常的吗?

wx-share
分享

5 个回答

user-title

huarenqiang5

有帮助

你这个主要考虑以下原因:

(1) 样品裂解或匀浆处理不彻底。

(2) 最后得到的RNA沉淀未完全溶解。

也可以试试过柱法、磁珠法等。

user-title

土井挞克树

有帮助

减少rna破坏,在收集到生物材料之后,最好能即可进行RNA制备工作。若需暂时储存,则应以液氮将生物材料急速冷冻后,储存于-80℃冷冻柜。在制备RNA时,将储存于冷冻柜的材料取出,立即以加入液氮研磨的方式打破细胞,不可以先行解冻,以避免RNase的作用。

user-title

juyue2010

有帮助

可能是操作问题,可以使用柱提法

user-title

dxyc42u

有帮助

这应该是操作问题,比如第一步裂解不充分

user-title

loveliufudan

有帮助

使用Trizol法提取RNA是常用的方法之一,但是提取RNA的浓度受到多种因素的影响,如样本的质量、处理过程中的误差以及实验条件等等。

以下是一些提高RNA浓度的建议:

样本的质量对RNA的提取很重要,因此应该选择新鲜的组织或细胞,并在操作前冷冻保存。

Trizol法提取RNA的关键步骤是异硫酸盐和乙醇洗涤。在异硫酸盐和乙醇添加时需要注意比例和速度,如果不严格按照步骤操作可能会导致RNA丢失或者不纯。

在酶解期间应该充分震荡,以保证RNA的完全释放。此外,为了防止RNA降解,在酶解期间应该避免暴露在室温下。

在洗涤RNA时,应该使用冰冷的75%乙醇。此外,在洗涤前应该将离心管和吸头预冷却。

最后,在提取RNA时应该避免形成泡沫,因为这可能会导致RNA降解。

如果你已经按照上述建议进行了操作,并且RNA浓度仍然很低,可能需要尝试其他RNA提取方法,如琼脂糖柱法、磁珠法、固相萃取法等等。

至于你提到的“一百万个细胞到最后只有几十的浓度”是否正常,这取决于你的实验目的和样本质量。一般来说,用Trizol提取RNA,一百万个细胞提取的RNA浓度可以在数百ng/μl至数十ng/μl之间。如果浓度低于这个范围,可能需要检查操作过程中是否有误或者尝试其他提取方法。

提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序