RAW264.7细胞怎么培养才能不极化？

环境稳定，操作时动作轻柔，少刺激，血清尽量选好的，不要一直培养传代，要经常性冻存后再复苏

RAW264.7细胞的培养方法

1.细胞培养

RAW264.7细胞在含10％的新生小牛血清及100 U/mL青霉素、链霉素的DMEM高糖培养液中进行培养，培养箱培养条件设定为5％CO2，37℃，隔天换液，每日观察细胞的生长状况。

2.细胞传代

待RAW264.7细胞生长至70～80％融合度时，弃去旧的细胞培养液，并用PBS洗涤细胞2次，加入0.25%的胰蛋白酶，于倒置显微镜下观察细胞形态变化，当细胞出现胞质回缩，胞体变圆，细胞间隙变大时，弃去消化液，立即加入含10%血清的细胞培养液终止消化，用吸管吸取培养液，反复轻柔吹打贴壁的细胞使之脱落并悬浮，调整细胞至合适密度后接种于新的培养皿中，置于5％CO2，37℃培养箱中培养。

3.细胞冻存

将取于对数生长期且生长状态良好的RAW264.7细胞用0.25%的胰蛋白酶消化后，制成单细胞悬液并收集于15 mL离心管，1 000 r/min，离心5 min，然后弃去上清液，用冻存液（以血清和DMSO按9:1的比例混合，现配现用）混悬沉淀细胞，并调整细胞浓度至（1~10）×106/mL，将细胞悬液分装入冻存管内（1 mL/管），旋紧管盖，封口，标记细胞名称和冻存日期，按4℃30 min，-20℃2 h，-80℃ 过夜顺序降温后，最后放置于液氮罐中长期保存。

4.细胞复苏

从液氮罐中取出需要复苏的RAW264.7细胞冻存管，将冻存管放入一次性的PE手套中，迅速投入到已预热至37℃的水浴锅中，并不断摇动直至冻存液完全融化，将细胞悬液移入离心管，1 000 r/min，离心5 min，弃上清，加入含10%血清的新鲜细胞培养液制成细胞悬液，调整细胞至合适密度后接种于新的培养皿中，置于5％CO2，37℃培养箱中培养。

首先就是保证环境稳定，营养充足。保证ph内环境稳定。

RAW264.7细胞是一种常用的小鼠巨噬细胞系，常常用于研究免疫、炎症和癌症等方面。这些细胞在不同的条件下可能会极化为M1型或M2型巨噬细胞。如果您希望保持这些细胞未极化状态，可以考虑以下建议：

1.使用完整的培养基：RAW264.7细胞通常在含有10%胎牛血清的DMEM培养基中生长。如果您想防止细胞的极化，可以使用未加M-CSF或GM-CSF等巨噬细胞分化因子的完整培养基。

2.控制细胞密度：RAW264.7细胞易于聚集，密度过高可能导致细胞极化。因此，建议您每隔一两天检查一下细胞的密度，并根据需要调整细胞的分裂比例。

3.使用少量的激活物：M1型和M2型巨噬细胞通常是由细胞激活物引起的。如果您希望保持细胞未极化状态，可以尽量避免添加激活剂，如LPS、IFN-gamma等。

4.注意细胞通路的选择：RAW264.7细胞可以通过不同的信号通路激活，从而导致M1型或M2型极化。因此，如果您需要使用激活剂，可以选择通过非M1/M2通路激活的剂量和时间。例如，使用IL-4可以导致M2型巨噬细胞的极化，但在低剂量下可以抑制M1型极化。

5.控制细胞的时间：RAW264.7细胞在长期培养时容易极化。因此，建议您不要让细胞在培养皿中超过72小时，并定期更换培养基。

请注意，即使您采取了上述措施，RAW264.7细胞仍可能在特定条件下发生极化。因此，为了更好的结果，您可能需要进行进一步的实验优化。