96孔板 cck8实验加药方式

贴壁加入，加入之后晃动培养板这样不会造成局部浓度过高

加药的两种方法：

1.把每一个孔的液体吸出来，再把用培养基配好的药加进去。吸液体的时候，把板子倾斜竖起来70°（方便你看），用200μl的枪调最大量程，套一个200μl枪头再套一个10μl枪头，从孔的最低点把液体吸出来。注意不要一下子把整个板的液体全吸出来，因为你加药前还要每一个浓度都混匀，很费时，最好不要让你的细胞空置太久，一般都是半个板地来。

2.不吸液，直接加药，不过记住要配2x浓度的药，因为还有之前的培养基，加进去就会稀释成一半了。后续也要加20μl的cck-8（cck-8的量是孔内液体的10%）。注意200μl的体液太满了，很容易洒出来。

加cck-8 两种选择，一是用10μl的枪头加，先把5ml的cck-8用1.5mlEP管分装（方便操作），用10μl的枪头吸cck-8，注意要把枪头外壁沾的液体揩干净，枪头伸进液面（刚好伸入，不要进太深），打进去不出气泡，这样很费神，而且手慢的，第一个孔和最后一个孔的OD值就有了这十几分钟的误差了；二是用200μl的枪头加，先准备好无血清培养基和cck-8，混匀，然后把96孔板的里的液体一次性全吸出来，枪调110μl，加入含cck-8无血清培养基。这样可以很好地避免微量量程带来的误差。

两种方法，每孔直接加入10ul的CCK-8溶液,或者配置成含10%CCK-8溶液的培养基以换液的形式加入,注意加入过程中避免产生气泡，可以将枪头浸入培养液中缓慢加入。

在96孔板中进行CCK8实验时，加药的方法可以有多种，但为了减少药物局部浓度过高的情况，可以尝试以下方法：

将原先的培养基吸走，然后添加100μL含有正确浓度药物的新培养基，使得药物能够均匀地分布在整个孔中。

将药物预先溶解在培养基中，形成药物母液，然后将药物母液均匀加入到各个孔中，使得药物浓度均匀分布。

在上述两种方法中，建议通过试验确定最佳的药物浓度和加药时间，以获得最佳的实验结果。此外，在进行CCK8实验时，还需要注意对照组的设置，以便正确比较不同处理组之间的细胞增殖差异。

比较合适的方法是弃掉原有培养基，将配置好工作浓度的培养液，按100ul/孔加入，如果检测48、72小时以上，加入的量可以适当增加。