相关实验:含有目的基因真核表达 pEGFP-C1 载体的构建实验
dxy_l925frqr
提质粒,测出来浓度90多,用通用引物和本身的引物做质粒pcr也有正确的条带,但是凝胶电泳确没有条带,原因是什么呢?
jupiter鑫
楼主问题解决了吗? 我也遇到这个问题,希望大家多多交流
Gaara205
我也遇到这样的问题,楼主最后解决了没?
小何尖尖角DIJB
同学,最后你是怎样解决的呀,我最近也遇到和你一模一样的问题
毛利小五郎的徒弟
可能是样本量太小,或者是质粒太小,胶分别不出来
dxy_l925frqr
质粒七千多,加了五微升
loveliufudan
高质量提取的质粒 DNA 实际上不能保证在 PCR 实验中得到正确的条带。在凝胶电泳中没有条带有多种可能的原因,包括:
1.PCR 反应条件不适宜:过高或过低的温度,不适当的添加剂,不合适的循环参数都可能影响 PCR 效果。
2.污染:实验中的污染物,如酶,核酸等,可能干扰 PCR 反应。
3.引物失效:如果引物设计不当或引物质量不佳,可能导致 PCR 失效。
4.目标基因序列不纯:如果质粒中存在杂合子或其他非目标基因序列,可能干扰 PCR 反应。
建议检查实验条件,排除污染,重新评估引物,或重新提取质粒,以确保得到正确的结果。
dxy_l925frqr
pcr条带是对的,但是跑质粒没有条带,也加了loading
申东熙老伯
测出来浓度90多,不太高,凝胶电泳上样时可以加入4微升左右的质粒加适当loading看一下。
dxy_l925frqr
加了loading,pcr条带是对的,但是质粒跑不出来条带
申东熙老伯
质粒是反复冻融了吗?还是说没有等待完全溶解就上样了?反复冻融质粒可能会降解,没完全溶解可能就直接没洗到DNA。
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