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为什么质粒提出来了跑胶确没有条带?

相关实验:含有目的基因真核表达 pEGFP-C1 载体的构建实验

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dxy_l925frqr

提质粒,测出来浓度90多,用通用引物和本身的引物做质粒pcr也有正确的条带,但是凝胶电泳确没有条带,原因是什么呢?

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6 个回答

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jupiter鑫

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楼主问题解决了吗? 我也遇到这个问题,希望大家多多交流

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Gaara205

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我也遇到这样的问题,楼主最后解决了没?

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小何尖尖角DIJB

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同学,最后你是怎样解决的呀,我最近也遇到和你一模一样的问题

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毛利小五郎的徒弟

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可能是样本量太小,或者是质粒太小,胶分别不出来

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dxy_l925frqruser-title

质粒七千多,加了五微升

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loveliufudan

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高质量提取的质粒 DNA 实际上不能保证在 PCR 实验中得到正确的条带。在凝胶电泳中没有条带有多种可能的原因,包括:

1.PCR 反应条件不适宜:过高或过低的温度,不适当的添加剂,不合适的循环参数都可能影响 PCR 效果。

2.污染:实验中的污染物,如酶,核酸等,可能干扰 PCR 反应。

3.引物失效:如果引物设计不当或引物质量不佳,可能导致 PCR 失效。

4.目标基因序列不纯:如果质粒中存在杂合子或其他非目标基因序列,可能干扰 PCR 反应。

建议检查实验条件,排除污染,重新评估引物,或重新提取质粒,以确保得到正确的结果。

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dxy_l925frqruser-title

pcr条带是对的,但是跑质粒没有条带,也加了loading

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申东熙老伯

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测出来浓度90多,不太高,凝胶电泳上样时可以加入4微升左右的质粒加适当loading看一下。

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dxy_l925frqruser-title

加了loading,pcr条带是对的,但是质粒跑不出来条带

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申东熙老伯

质粒是反复冻融了吗?还是说没有等待完全溶解就上样了?反复冻融质粒可能会降解,没完全溶解可能就直接没洗到DNA。

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