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土井挞克树
可以做x线引导下穿刺,不然很难定位准确。
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鞘内注射- 注射步骤
1、使用毛巾覆盖在小鼠头部和背部,露出髂嵴以下的腰部区域;用非惯用手的拇指和食指抓住鼠的髂骨(髋骨),手的顶部轻轻放在小鼠身体和头部上,使其保持平静。
注:在髂骨上的握力应该足够强,以固定小鼠的腿部活动,并使腿部向外和向下伸展。
2、使用惯用手食指从腰椎到骶部沿脊柱轻轻按压,同时使用非惯用手轻轻上拉小鼠,以打开椎节之间的空间,方便进针。
3、将1 ¼”号针的斜面指向小鼠头部,然后将针以70°角插入脊柱中线的腰椎处,当感觉针碰到骨头时,将针的角度调整到30°夹角,并将针插入椎节之间。
注:需多次尝试找到合适的进入点,针头进入脊柱后推针没有阻力,尾巴或后腿的反射性弹跳出现时,说明已正确入针。
4、轻轻压下注射器的活塞,将5-10μL的AAV病毒悬液注射至蛛网膜下腔。
注:注射时间控制在10-30s较好,速度太快会导致小鼠后腿抽筋,该现象会在60s内消失。
5、注射后,将针180°旋转1-2次,然后将针从脊柱中取出。
6、小鼠放回笼子观察,确认恢复正常运动功能。
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