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细胞反复复苏反复污染,有没有解决办法呀,头疼,也不知道是什么污染,传2-3代,细胞

相关实验:冻存细胞的复苏

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小小菜鸟8

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3 个回答

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陈皮712

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先检查培养箱、培养基、耗材(培养瓶等)是否有污染,细胞实验操作是否规范。反复冻存复苏恐怕不能解决污染问题,并且还会给细胞带来巨大的伤害。如果是贴壁细胞,可尝试以下方法:先将细胞消化下来,加入20%双抗完全培养基(10ml培养基+2ml双抗)终止消化并重悬,浸泡10分钟,1000rpm离心5分钟,弃上清。再加入20%双抗PBS清洗(10mlPBS+2ml双抗),1000rpm离心5分钟,重复2次。随后配制含10%双抗的完全培养基,重悬细胞,再铺瓶,放入培养箱中培养24小时。24h后观察细胞是否仍有污染,如无污染,可以更换为普通完全培养基培养。如污染仍存在,重复上述过程。可视污染类型加入双抗、三抗、红霉素等不同抗生素,操作过程同上。

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whilt-shirt

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有可能是培养箱或者细胞间污染了,建议消毒后重试

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Eason老歌迷

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反复出现污染,需要检查操作人员的无菌操作技术,检查相关培养基与试剂是否为操作者个人专用,检查操作者的清洁情况:包括培养操作前后是否洗手;是否更换实验服;是否扎好头发;进行细胞培养时是否严格按照无菌要求佩戴实验服具(包括实验服、口罩、防尘帽、手套等)。若污染还是反复出现,问题往往出自使用试剂,需立即进行检查。

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