SeaGoddd
有没有人做过耳蜗基底膜体外培养后用neurofliament免疫荧光染神经纤维和螺旋神经节的?很久之前做过一次染出来过,最近做了很多次染不出来,Trion X-100用到1% +5%牛血清白蛋白+1:200 neurofliament 一抗4°C过夜,二抗用Alexa Fluor® 594 Goat anti-mouse IgG (minimal x-reactivity) Antibody 1:200,室温孵育2h,纤维染不出来。因为我的细胞是小鼠身上的,我用的一抗也是小鼠抗NF200,会不会是因为这个原因呢?
balalaLy
我4年前有做过,NF200确实不好染,实在染不好,你可以考虑换另一个Marker,或者用Neun,丁大连老师有一篇文章就是染螺旋神经节的,你可以找来看一下。
Eason老歌迷
既然你做出来,那就按照你之前的配比来做。这次不成功,可能组织中的抗原被消耗掉了,在拿那个组织重新做应该效果不好。最好重新取组织,一抗的孵育时间可以延长一点,二抗的浓度可以适量提高。我觉得应该和Triton X-100 的浓度关系不大,参考文献中用的10%,但是混合到一抗孵育液中的最终浓度仍然是1%。
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