表达的GST蛋白一直不挂柱，无法纯化

dxy_btpk2zd7

2022-07-17

8M尿素过夜溶解包涵体，梯度透析复性（复性液配方：尿素8/6/4/4/0M(即PBS)， 50mM TB 8.0， 100mM NaCl， 10mM DTT， 0.5mM GSSG， 5%甘油）每个梯度12h，最后蛋白部分有活性，但是无法纯化(磁珠和树脂柱子都试了) 蛋白不挂柱子。

做了大半年了，希望有经验的各位朋友不吝赐教，谢谢~

bamboopiggy

2022-07-20

有帮助

先确定你确实表达出了GST蛋白，如果一直不挂柱，感觉是gst没表达出来

天一湖医者

2022-07-17

有帮助

1. 过GST柱最好先和蛋白溶液孵育1-2小时，然后过柱子效果比直接流过好。

2. 洗脱液加还原性谷胱甘肽后pH下降很大，所以一定要把pH调回来。

Eason老歌迷

2022-07-17

有帮助

可能是上样流速太快，结合时间太短。可能是缓冲液不合适，柱子平衡不到位。可能是样品中GST融合蛋白浓度太低。可能是GST蛋白发生变性或聚集。