犊牛小肠上皮细胞提取后不贴壁，但是感觉培养瓶中细胞增多，怎么办

细胞不贴壁的一些原因

• 1. 胰酶消化时间把控不当：消化不够细胞本身就是成团的；若胰酶处理太久，容易造成细胞膜蛋白损伤，使细胞贴壁不紧，显微镜下观察立体感不强，严重的时候甚至会造成细胞死亡。

• 2. 缺少贴壁因子：血清中含有促贴壁因子，而无血清培养基工艺中由于缺少这种促贴壁因子，细胞的贴壁效果会下降很多。

• 3. 支原体或细菌的污染。

• 4. 培养液配制、储存不当，如pH值过碱，Gln量太少等原因。

• 5. 复苏的细胞本身状态不好，已经老化，失去贴附性。

• 6. 接种细胞数目太少，无法分泌足够的细胞外基质。

• 7. 复苏时处理速度太慢，复苏过程不当。

犊牛小肠细胞需要绝对的无菌条件，一般它不贴壁生长，可能有几个原因，可能是你的胰蛋白酶消化过度。或者有支原体污染。也可能是你的传代时机不对，细胞老化。或者你的接种细胞起始浓度太低或太高。