求助养LMH细胞细节

三只猫一只鼠

2022-06-29

想求助下养LMH细胞过程需注意哪些细节。

本人购买了两次国内的LMH细胞系，但是都没养起来。第一次的细胞株一到，消化一次后细胞全都不贴壁了，无论怎么换液，都没用！后来让公司售后，技术跟我说他们的也复苏不起来，可能得3周后给我售后了，第二次购买了另一家公司的LMH后，换了更优质的胎牛血清，用的康宁的细胞瓶，刚到的细胞又状态很差了，这次由于原瓶密度不高并未对细胞消化传代，可是细胞过夜之后状态依然变差了想求助各位大佬帮忙分析下原因？

图1：刚到细胞状态

图2：稳定5-6h细胞状态

图3：换液12h后细胞状态

2 个回答

天一湖医者

2022-06-30

有帮助

细胞状态变差主要是由于两种原因：1 细胞营养条件不够2 细胞被污染了

Eason老歌迷

2022-06-29

有帮助

1、培养基及培养冻存条件准备：准备DMEM/F-12 培养基；特级胎牛血清，10%；双抗1%。细胞贴壁性差，补液的时候不要冲刷到细胞层，2-3天换液，90%以上汇合度传代。培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

2、细胞处理：冻存细胞的复苏：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。细胞冻存：收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞以备后续实验使用。