悬浮细胞怎么做激光共聚焦荧光显微镜？

细胞应培养在Confocal专用小培养皿或盖玻片上，悬浮细胞，甩片或滴片后，用盖玻片封片。样品的Zda厚度约1~2mm，使用的盖玻片厚度应小于0.17mm，载玻片厚度应在0.8~1.2mm之间，而且表面光洁，厚度均匀，没有明显的干扰荧光。固定样品常用封片剂进行封片，常用PH8.5-9的PBS配制的甘油封片。

可能你有荧光的细胞少，你可以考虑把细胞用促贴壁试剂贴到玻片上做。

激光扫描共焦显微镜技术已应用于细胞形态定位、三维结构重组和动态变化过程的研究，并提供定量荧光测量和定量图像分析等实用研究手段。与其他相关生物技术相结合，已广泛应用于形态学、生理学、免疫学、遗传学等分子和细胞生物学领域。激光荧光共聚焦显微镜可以在偏光显微镜的基础上进行高分辨率成像，准确研究聚合物、聚合物熔体和残留碳的形态和性能，对推断材料的阻燃机理具有非常重要的作用。其常规样品制备要求如下：

　　1、染料的选择

　　由于显微镜使用单波长激光作为光源，因此荧光染料的选择应根据激光共聚焦显微镜的激光波长。如果同一样品中有多种荧光染料，请尽可能考虑它们的发射波长。不要重叠，避免交叉颜色问题。

　　2、样品载体的选择

　　激光荧光共聚焦显微镜的一般高倍物镜是油镜。数值孔径小，镜头与样品的工作距离不超过0.17mm。因此，如果观察样品是贴壁细胞或组织切片，则可以使用正常负载。幻灯片和封面幻灯片都可以。如果是悬浮细胞或悬浮颗粒，可以将样品放在激光共聚焦显微镜专用的培养皿中进行观察。

　　3、封板的选择

　　如果样品只需观察一次且不易淬灭荧光，可使用一定浓度的甘油混合物封膜。如果样品需要放置一段时间，需要多次使用，应使用抗荧光淬灭密封，以减少荧光信号的损失。