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请问提取植物DNA时如何有效的去除酚类和多糖物质

相关实验:DNA 降解断裂法检测肿瘤细胞凋亡

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yangyang214

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4 个回答

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bamboopiggy

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取植物材料研磨后加入核酸分离缓冲液和2-巯基乙醇,混匀后置水浴中;离心机中离心后弃上清;加入1×PBS溶液,研磨仪上震荡混匀,离心后弃上清;向沉淀中加入预热的3×CTAB裂解液并混匀,水浴裂解;加等体积酚/氯仿/异戊醇混合液,混匀,离心;取上清,加入等体积氯仿/异戊醇混合液,混匀,离心;取上清,加入NaCl和冰异丙醇,混匀,沉淀1~3小时;取出离心后,将沉淀用乙醇洗涤,风干后加TE溶解,即完成提取

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天一湖医者

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多糖的去除。高盐法。用乙醇沉淀时,在待沉淀溶.液中加入1/2体积的5MNaCI、高盐可溶解多糖。用多糖水解酶将多糖降解。在提取缓冲液中加一-定 量的氯苯(1/2体积)。氯苯可以与多糖的羟基作用,从而去除多糖。用PEG8000代替乙醇沉淀DNA,在500 μ LDNA液中200μl20%PEG8000(1.2MNaCI)。冰浴20min.核酸分离。

多酚的去除:在抽提液中加入防止酚类氧化的试剂、β -巯基乙醇、抗坏血酸、半胱氨酸、二硫苏糖醇等加入易与酚类结合的试剂,如PVP(聚乙烯吡咯酮),PEG(聚乙二醇)。它们与酚类有较强的亲和力、可防止酚类与DNA的结合。

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未来9

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材料粉碎后,在加细胞裂解液前,加入一些缓冲液清洗来除去多糖:缓冲液配比(100mmol/L Tris-HCl,pH8.0;100mmol/L EDTA;250mmol/L NaCl;50ug/mL蛋白酶K;1%月桂酸钠Nalauroylsarcosine),50度保温过<Rozman和Komel,1994>,或者只用100mmol/L Tris-HCl溶液清洗<李晓波等,2002>。

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汤姆卜丽波

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样品粉碎后,在加细胞裂解液前,加入一些缓冲液清洗来除去多糖:

缓冲液配比(100mmol/LTris-HCl,pH8.0;100mmol/LEDTA;250mmol/LNaCl;50ug/mL蛋白酶K;1%月桂酸钠Nalauroylsarcosine),50度保温过夜,或者只用100mmol/LTris-HCl溶液清洗。

去除多酚成分,可以添加Vc等抗氧化剂(参考浓度30~60mmol/L)和PVP、PEG等酚的结合剂,防止酚类与DNA的结合

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